酵母双杂交技术步骤
答：酵母双杂交技术是一种在分子生物学研究中常用的技术，主要用于研究蛋白质之间的相互作用。这种技术的原理是基于真核生物的转录因子TFIID的结构，其中TFIID由TD和TBP两个亚基组成，它们之间通过一个名为helix-loop-helix的结构相互连接，形成稳定的复合物。在酵母双杂交系统中，TD和TBP被分别替换为两个目标...
答：Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型，将前者与Gal4的BD结构域融合，另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”（bait）和“猎物”或靶蛋白（prey or target protein）。如果在Snf1和Snf2之间...
答：可参考：诱饵基因转化筛库宿主菌Y190 1） 3 个1mm 克隆接种于3mlYPD 液体培养基30℃振荡培养20 小时(过夜)，OD600 达到1.2 左右。2） 将此3ml 菌液接入大体积(体积视转化个数定)YPD 中培养4 小时左右，使 培养液OD600 达到0.6。3） 50ml 离心管收集菌液(Falcon, BD)，Eppendorf Centrifuge ...
答：膜体系酵母双杂交载体选择攻略 膜体系酵母双杂选择载体是根据诱饵蛋白质定位的不同来选择，有利于互作蛋白相连的泛素NubG和Cub-LexA-VP16相互作用，被UBPs识别，从而启动下游报告基因表达。那么膜体系有哪些载体？具体要如何选择？下面小正给您支支招。1、膜体系有哪些诱饵载体？膜体系酵母双杂交有三种诱饵...
答：探索基因互动的黄金钥匙：酵母双杂交技术详解 在基因研究的浩渺宇宙中，理解蛋白质之间的相互作用至关重要。酵母双杂交技术，作为这一领域的明星工具，分为核内和膜系统的两种策略，它们各自擅长于揭示不同环境下的蛋白互动秘密。核内双杂交的优雅舞蹈 核体系的酵母双杂交，以GAL4转录因子的BD-AD结构为...
答：(2)应用：发现新的蛋白质和蛋白质的新功能；在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用；筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影响；建立基因组蛋白连锁图。[考点]酵母双杂交系统的基本原理和应用。酵母双杂交体系(two-hybrid system)也叫interaction trap(相互作用陷阱)，是上世纪90年代初发展起来的...
答：一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因在酵母细胞内的表达，如果检测到报道基因的表达产物，则说明两者之间有相互作用，反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化...
答：然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用。比如：1、诱饵蛋白表达载体与猎物蛋白表达载体的构建 2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性，毒性检测 3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告 4、 无相互作用时诱饵和猎物蛋白的表达情况的Western blotting检测 酵母双杂交...
答：酵母双杂交法的原理：典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分...
答：注意事项 （1）酵母双杂交对照的设定 常规的酵母双杂交操作时一般会设定阳性对照、阴性对照以及显色系统对照三种对照，以MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统为例：阳性对照：pGADT7-T + pGBKT7-53，其中T蛋白和53蛋白是已经明确在酵母细胞内能够发生结合并启动报告基因表达的两种蛋白。阴性对照：pGADT7-...
网友评论：
辕霞18126481089：
谁能解释一下酵母双杂交系统的基本原理和操作流程 -
53519冯许
： 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统,也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法.该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.
辕霞18126481089：
酵母双杂交的具体过程是什么?(中文) -
53519冯许
： 菌株与质粒AH109酵母菌株(MATa,trp1. 901,leu2—3,112,ura3-52,his3-200,gal4A,gal8O~X, LYS2::G地1U^s-GALlT^T^-HIS3, G U^s—GAI2T^T^- ADE2,URA3::h吐1U^s.h吐1T^T^.1acZ),YM187酵母 菌株(NATQ,um3-52,his3-200,ade2—101,trpl-...
辕霞18126481089：
酵母双杂交系统的介绍 -
53519冯许
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
辕霞18126481089：
如何用酵母双杂交系统探究蛋白质的功能 -
53519冯许
： 大多数双杂交系统往往同时使用两个甚至三个报道基因, 其中之一是LacZ. 这些改造后的基因在启动子区有相同的转录激活因子结合位点, 因此可以被相同的转录激活因子(如上述的Gal4蛋白)激活. 通过这种双重或多重选择既提高了检测灵...
辕霞18126481089：
酵母双杂交的特点 -
53519冯许
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
辕霞18126481089：
酵母双杂文库筛选出互作蛋白,然后再怎么做 -
53519冯许
： 然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用. 比如: 1、诱饵蛋白表达载体 2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性,毒性检测 3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告 4、 无相互作用时诱饵...
辕霞18126481089：
酵母单双杂交? -
53519冯许
： 酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的,研究活细胞内蛋白质相互作用,对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到,它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术.大量的研究文献表明...
辕霞18126481089：
酵母双杂交的常见问题 -
53519冯许
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
辕霞18126481089：
酵母菌双杂交到底是什么? 请解释一下 -
53519冯许
： 100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问.酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段.实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合.如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或能够在基本培养基上生长),反之则不能.参考资料:http://baike.baidu.com/link?url=gzze1wAVvxbMwPcV8xUjouZsKo1gCjEVnSCm7QeV0m-3CW_1od9IqgWbY25byn91OzKfM5kGeMRah5KdaccKta
辕霞18126481089：
酵母双杂交的原理? -
53519冯许
： 酵母双杂交系统由 Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
