酵母双杂交技术的缺点
答：酵母单杂交系统和双杂交系统是两种常用的蛋白质相互作用检测方法，它们的主要区别在于检测的原理和应用范围不同。酵母单杂交系统Y1H（Yeast One Hybrid System）用于发现DNA序列与转录因子结合的技术。该系统通过将感兴趣的DNA序列插入到启动子上游的启动子活化区域AD（Activation Domain）所编码的报告基因前，...
答：1.在配置营养缺陷型培养基时，会有大量的气泡产生，这是为什么？培养基温度太低,SD不要从冰箱中取出就用.用枪时小心打出液体,枪头中留一点点液体.最好冲向容器壁,而不是直接冲向液体.2.进行了两次质粒转化酵母均不成功，在30度温浴时震荡了，与这有关吗？震荡? 上下颠倒就可以. DMSO对细胞壁...
答：然后共转染同一酵母细胞，利用已建立的易感细胞 cDNA文库，筛到了阳性克隆。酵母双杂交技术的优点是灵敏度高，特异性较 好，缺点是容易出现假阳性和假阴性，而且对蛋白 质在细胞中的定位有要求。为了克服上述缺点，人们进一步优化出所谓“双 筛选系统”，即蛋白质相互作用必须同时激活两个 以上报道基因，...
答：而无需复杂的蛋白质分离纯化操作，故在蛋白研究中，具有一定的优势；而且，酵母属真核细胞，通过酵母系统得到的结果比其他体外技术获得的结果更能体现真核细胞内基因表达调控的真实情况.1 酵母单杂交技术的原理 酵母单杂交技术最早是1993年由Li et al [1,2]从酵母双杂交技术发展而来，酵母双杂交技术通过...
答：在双杂交鉴定过程中要经过两次转化，这个工作量是相当大的，特别是寻找新的作用蛋白质的时候尤其如此。而且，酵母细胞的转化效率比细菌要低约4个数量级。因此转化步骤就成为双杂交技术的瓶颈。Bendixen等人通过酵母接合型的引用，避免了两次转化操作，同时又提高了双杂交的效率。在酵母的有性生殖过程中涉及...
答：酵母双杂交法的原理：典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分...
答：作用相同，原理不同。1、相同点：酵母双杂交技术和荧光共振能量转移技术都能够用于分析蛋白质分子间是否相互作用。2、不同点：酵母双杂交技术原理是酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。荧光共振能量转移技术的原理是采用物理方法去检测分子间的相互作用。
答：真菌孢子很难杀死。如果可能的话，挑酵母单细胞重新纯化培养，再做实验。
答：酵母双杂交技术是一种在分子生物学研究中常用的技术，主要用于研究蛋白质之间的相互作用。这种技术的原理是基于真核生物的转录因子TFIID的结构，其中TFIID由TD和TBP两个亚基组成，它们之间通过一个名为helix-loop-helix的结构相互连接，形成稳定的复合物。在酵母双杂交系统中，TD和TBP被分别替换为两个目标...
网友评论：
滑克18868789069：
酵母双杂交的局限性 -
48028盖居
： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
滑克18868789069：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
48028盖居
：[答案] 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号...
滑克18868789069：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
48028盖居
： 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号放大;④检测的结果是基因表达产物的累积效应,可检测存在于蛋白质间的微弱或暂时的相互作用.2、真实性.检测在活细胞内进行,作用条件与作用力无需模拟,在一定程度上代表细胞内的真实情况.3、简洁性.融合蛋白相互作用后,减少了制备抗体和纯化蛋白质的繁琐步骤. 3、广泛性.采用不同组织器官细胞类型和分化时期的材料构建cDNA文库,能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质,适用于部分细胞质、细胞核及膜结合蛋白.
滑克18868789069：
酵母双杂交的常见问题 -
48028盖居
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
滑克18868789069：
酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒,没有 -
48028盖居
： 酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒 发展起来的各种双杂交系统大多是以Fields等人建立的系统为基础的.这些新系统主要对报道基因、“诱饵”表达载体以及“猎物”表达载体等做了一些改进.其中一个重要改进是引入额外的报...
滑克18868789069：
酵母双杂交 - 酵母双杂交两种菌杂交效率不高有哪些原因?
48028盖居
： 酵母双杂交技术研究进展 张迪 霍克克 顾科隆 赵翔 李育阳 提 要 酵母双杂交技术是一种有效的真核活细胞内研究方法,在蛋白质相互作用的研究方面得到了广泛的应用并取...
滑克18868789069：
酵母双杂交的特点 -
48028盖居
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
滑克18868789069：
酵母菌作为宿主细胞有哪些优点缺点 -
48028盖居
： 酵母宿主细胞AH109和Y190主要是筛选方式和用途的侧重点不同酵母宿主细胞AH109株为色氨酸营养缺陷,可作为蛋白真核表达系统,也可用于酵母双杂交. 酵母菌株Y190更多用于酵母双杂交
滑克18868789069：
酵母单杂交系统与酵母双杂交系统的异同点? -
48028盖居
： 酵母双(单)杂交系统:Y2H膜蛋白系统;Grow' ' n' ' Glow GFP酵母单(双)杂交系统;Grow´ n´ Glow ACE1酵母双杂交系统;Y2H膜蛋白系统cDNA文库;酵母载体;酵母菌;酵母转化和质粒提取;β -半乳糖苷酶活性检测试剂盒; 噬菌体展示:pSKAN噬菌体展示系统;Anti-plll (g3p)抗体;抗体;pSKAN8载体;pMAMPF3-PSTI4载体;Lambda PS噬菌体裂解物;Anti-hPSTI 基因文库:Y2H cDNA文库;Lambda PS基因文库;
滑克18868789069：
有关酵母双杂交系统的几个问题本人为新手,有相关酵母双杂交系统的问题想要请教一下各位前辈1.在配置营养缺陷型培养基时,会有大量的气泡产生,这是... -
48028盖居
：[答案] 1.在配置营养缺陷型培养基时,会有大量的气泡产生,这是为什么? 培养基温度太低,SD不要从冰箱中取出就用. 用枪时小心打出液体,枪头中留一点点液体.最好冲向容器壁,而不是直接冲向液体. 2.进行了两次质粒转化酵母均不成功,在30度温浴...
