膜系统酵母双杂交步骤
答：酵母操作手册，将转化好的细胞按照1：10、1：100、1：1000三种不同浓度稀释，然后取100 铺于SD／一 Trp／．Leu平板上，待长出克隆后计算生长克隆数目 (cfu)。按上述公式计算转化效率。1．6 酵母双杂交交配实验 将pGBKT~．p53和 pGADTrT质粒分别转化于酵母菌株AH109和 YM187中，待在相应SD缺陷培养...
答：结论2：构建的诱饵载体是否存在移码突变，泛素特异性蛋白酶系统功能是否可以正常发挥功能，是否进行后续筛选实验。结果显示可以进行后续筛选试验。3、自激活及毒性检测 结论3：诱饵载体pBT3-STE-XXX是否存在自激活，是否可以后续筛选实验。结果显示可以进行后续筛选试验。4、酵母文库初筛 结论4：通过初筛共筛选...
答：1） 3 个1mm 克隆接种于3mlYPD 液体培养基30℃振荡培养20 小时(过夜)，OD600 达到1.2 左右。2） 将此3ml 菌液接入大体积(体积视转化个数定)YPD 中培养4 小时左右，使 培养液OD600 达到0.6。3） 50ml 离心管收集菌液(Falcon, BD)，Eppendorf Centrifuge 5810R, 700g (1，865rpm)，5 分钟...
答：首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一管中，这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。2.如果诱饵蛋白能直接激活报告基因的表达，该如何处理？该蛋白...
答：双 筛选系统”，即蛋白质相互作用必须同时激活两个 以上报道基因，具有两种以上的相应表型才算是真 的阳性结果。另外，人们也改造了酵母双杂交系统 所用的载体系统，将在细胞浆内发生的蛋白质相互 作用转移到细胞膜上进行，以此来更容易地筛选膜 蛋白受体，如Ras recruitment system（RRS）。
答：⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内，而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等，这些反应在核内无法进行。另外有些蛋白的正确折叠和功能有赖于其他非酵母蛋白的辅助，这限制了某些细胞外蛋白和细胞膜受体蛋白等的研究。⑵酵母双杂交系统的一个重要的问题是假阳性。由...
答：从基因文库中筛选某一克隆的常用办法是分子杂交。首先把属于一个文库的细菌或噬菌体以较低密度接种在培养皿上以取得相当分散的菌落或噬菌斑,然后用硝酸纤维滤膜吸印,使培养皿和滤膜的相对应的位置上具有相同的克隆。同时另行制备供分子杂交用的探针。为了筛选真核生物的某种基因,常从它的转录产物mRNA经反向转录(见中...
答：因此转化步骤就成为双杂交技术的瓶颈。Bendixen等人通过酵母接合型的引用，避免了两次转化操作，同时又提高了双杂交的效率。在酵母的有性生殖过程中涉及到两种配合类型：a接合型和α接合型，这两种单倍体之间接合（mating）能形成二倍体，但a接合型细胞之间或α接合型细胞之间不能接合形成二倍体。根据酵母...
答：【答案】：酵母双杂交技术，真核生物的转录因子大多是由两个结构上分开、功能上独立的结构域组成的。如GAL4的N端1～147氨基酸是DNA结合域(BD)，其C端768～881氨基酸是转录激活域(AD)。一般情况下，AD能与GA14效应基因启动子上游的特定DNA区段(UAS)相结合，AD则推动了转录起始。免疫共沉淀技术，将...
网友评论：
郟使15397867554：
酵母双杂交的具体过程是什么?(中文)
7529羊钟
： 菌株与质粒AH109酵母菌株(MATa,trp1. 901,leu2—3,112,ura3-52,his3-200,gal4A,gal8O~X, LYS2::G地1U^s-GALlT^T^-HIS3, G U^s—GAI2T^T^- ADE2,URA3::h吐1U^s.h吐1T^T^.1acZ),YM187酵母 菌株(NATQ,um3-52,his3-200,ade2—101,trpl-...
郟使15397867554：
谁能解释一下酵母双杂交系统的基本原理和操作流程 -
7529羊钟
： 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统,也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法.该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.
郟使15397867554：
酵母双杂交系统的介绍 -
7529羊钟
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
郟使15397867554：
酵母双杂交的特点 -
7529羊钟
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
郟使15397867554：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
7529羊钟
： 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号放大;④检测的结果是基因表达产物的累积效应,可检测存在于蛋白质间的微弱或暂时的相互作用.2、真实性.检测在活细胞内进行,作用条件与作用力无需模拟,在一定程度上代表细胞内的真实情况.3、简洁性.融合蛋白相互作用后,减少了制备抗体和纯化蛋白质的繁琐步骤. 3、广泛性.采用不同组织器官细胞类型和分化时期的材料构建cDNA文库,能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质,适用于部分细胞质、细胞核及膜结合蛋白.
郟使15397867554：
怎样确定一个蛋白是另一个物质的受体 -
7529羊钟
： 一、酵母双杂交系统:酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法.其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后,诱饵蛋白结合于报道基因的启动子,启动报道基因在酵母细胞内的表达,如果检测到报道基因的表达产...
郟使15397867554：
酵母单杂交系统与酵母双杂交系统的异同点? -
7529羊钟
： 酵母双(单)杂交系统:Y2H膜蛋白系统;Grow' ' n' ' Glow GFP酵母单(双)杂交系统;Grow´ n´ Glow ACE1酵母双杂交系统;Y2H膜蛋白系统cDNA文库;酵母载体;酵母菌;酵母转化和质粒提取;β -半乳糖苷酶活性检测试剂盒; 噬菌体展示:pSKAN噬菌体展示系统;Anti-plll (g3p)抗体;抗体;pSKAN8载体;pMAMPF3-PSTI4载体;Lambda PS噬菌体裂解物;Anti-hPSTI 基因文库:Y2H cDNA文库;Lambda PS基因文库;
郟使15397867554：
酵母双杂交实验有哪些注意事项 -
7529羊钟
： 如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办?在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好.首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起.用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应.2.如果诱饵蛋白能直接激活报告基因的表达,该如何处理?该蛋白很可能有转录激活域,是个转录因子.可以通过基因重组切掉转录激活域,然后重新检测其是否自激活,但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作.
郟使15397867554：
如何用酵母双杂交系统探究蛋白质的功能 -
7529羊钟
： 大多数双杂交系统往往同时使用两个甚至三个报道基因, 其中之一是LacZ. 这些改造后的基因在启动子区有相同的转录激活因子结合位点, 因此可以被相同的转录激活因子(如上述的Gal4蛋白)激活. 通过这种双重或多重选择既提高了检测灵...
郟使15397867554：
酵母双杂交的原理? -
7529羊钟
： 酵母双杂交系统由 Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
