酵母双杂四缺板是什么
答：酵母双杂交二缺、三缺、四缺的作用如下。1、二缺：可以帮助分离染色体的配对。2、三缺：可以用于研究基因重组的机理。3、四缺：可以用于研究基因邻接检测和构建不同基因之间在空间上的位置关系。
答：因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因，所以在两缺板子上能生长。如果两个蛋白能互作，报告基因被激活，所以能在三缺或四缺板子上生长，如果不能互作，就不生长。
答：存在相互作用。诱饵蛋白与AD上的目的蛋白存在相互作用，这样的酵母菌株可以在三缺及四缺的培养基上生长，并启动β-半乳糖苷酶的基因进行转录。
答：酵母双杂四缺板上长但不变蓝的原因可能有以下几种：1. 培养条件问题：可能是由于培养条件不适合导致的，例如温度、养分等条件没有达到要求，导致酵母无法正常生长。2. 杂菌污染：培养基中被杂菌污染，导致酵母无法正常生长。3. 等待时间不足：在酵母双杂实验中，蛋白最常见的变化时间为12至24小时，有...
答：可能你挑选的阳性克隆是杂菌或假阳性。建议你再重复试验一次，并做好阳性对照和阴性对照
答：最近做酵母双杂交,筛选到12个阳性克隆,编码同一个基因,但是翻译不通,请高手如何解释?载体是clontech 首先谢谢各位老师的回答。用的菌株是clontech的Y2HGOLD菌株,是他们公司新开发的。我们挑选的阳性克隆是既能显色,又能在四缺板加毒素AbA,和16mM的3-AT.经测序他们是5个不同的克隆,但... 首先谢谢各位老师的...
答：一周。酵母双杂实验通常情况下是需要两周的时间，涂板是需要一周的时间进行发酵的。酵母是一种单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。一种肉眼看不见的微小单细胞微生物，能将糖发酵成酒精和二氧化碳，分布于整个自然界，是一种典型的异养兼性厌氧微生物，在有氧和无氧条件下都能够存活，是一种天然发酵...
答：通过酵母筛库得到一批互作的序列，当时筛库的时候四缺上长斑和显色都没有问题，现在将得到的序列转大肠杆菌提取质粒后，和诱饵重新做酵母双杂验证，得出酵母双杂筛库斑很小。
答：SPA)若细胞与兴趣蛋白结合目蛋白形种复合物：目蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA|PansobinSPA|Pansobin比较复合物离离经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳复合物四组经Western blotting用抗体检测目蛋白否预测蛋白种目蛋白细胞内与兴趣蛋白结合符合体内实际情况蛋白信度高种两缺陷：两种蛋白质结合能直接结合能第三者...
网友评论：
涂华18221671364：
酵母双杂交中为什么在双缺板上长?酵母双杂交中为什么在双缺板上长,
17309虞隶
： 你好,因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长.如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果不能互作,就不生长.酵母(saccharomyces) 是基因克隆实验中常用的真核生物受体细胞,培养酵母菌和培养大肠杆菌一样方便.酵母克隆载体的种类也很多.酵母菌也有质粒存在,这种2μm 长的质粒称为2μm 质粒,约6 300bp.这种质粒至少有一段时间存在于细胞核内染色体以外,利用2μm 质粒和大肠杆菌中的质粒可以构建成能穿梭于细菌与酵母菌细胞之间的穿梭质粒.酵母克隆载体都是在这个基础上构建的
涂华18221671364：
酵母菌双杂交到底是什么? 请解释一下 -
17309虞隶
： 100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问.酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段.实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合.如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或能够在基本培养基上生长),反之则不能.参考资料:http://baike.baidu.com/link?url=gzze1wAVvxbMwPcV8xUjouZsKo1gCjEVnSCm7QeV0m-3CW_1od9IqgWbY25byn91OzKfM5kGeMRah5KdaccKta
涂华18221671364：
请问 酵母双杂筛库在四缺培养基上显蓝斑后,提取prey(猎物质粒)时应用什么培养基摇菌比较好?为什么? -
17309虞隶
： 因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长.如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果不能互作,就不生长.
涂华18221671364：
酵母双杂交系统到底是啥回事?有啥用 -
17309虞隶
： 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
涂华18221671364：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
17309虞隶
： 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号放大;④检测的结果是基因表达产物的累积效应,可检测存在于蛋白质间的微弱或暂时的相互作用.2、真实性.检测在活细胞内进行,作用条件与作用力无需模拟,在一定程度上代表细胞内的真实情况.3、简洁性.融合蛋白相互作用后,减少了制备抗体和纯化蛋白质的繁琐步骤. 3、广泛性.采用不同组织器官细胞类型和分化时期的材料构建cDNA文库,能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质,适用于部分细胞质、细胞核及膜结合蛋白.
涂华18221671364：
酵母双杂交的具体过程是什么?(中文) -
17309虞隶
： 菌株与质粒AH109酵母菌株(MATa,trp1. 901,leu2—3,112,ura3-52,his3-200,gal4A,gal8O~X, LYS2::G地1U^s-GALlT^T^-HIS3, G U^s—GAI2T^T^- ADE2,URA3::h吐1U^s.h吐1T^T^.1acZ),YM187酵母 菌株(NATQ,um3-52,his3-200,ade2—101,trpl-...
涂华18221671364：
酵母双杂交实验有哪些注意事项 -
17309虞隶
： 如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办?在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好.首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起.用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应.2.如果诱饵蛋白能直接激活报告基因的表达,该如何处理?该蛋白很可能有转录激活域,是个转录因子.可以通过基因重组切掉转录激活域,然后重新检测其是否自激活,但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作.
涂华18221671364：
酵母双杂全段不结合,分段却会结合,为什么? -
17309虞隶
： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
涂华18221671364：
酵母双杂文库筛选出互作蛋白,然后再怎么做 -
17309虞隶
： 然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用. 比如: 1、诱饵蛋白表达载体 2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性,毒性检测 3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告 4、 无相互作用时诱饵...
涂华18221671364：
酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒,没有 -
17309虞隶
： 酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒 发展起来的各种双杂交系统大多是以Fields等人建立的系统为基础的.这些新系统主要对报道基因、“诱饵”表达载体以及“猎物”表达载体等做了一些改进.其中一个重要改进是引入额外的报...
