实验室测定蛋白质分子量的方法有哪些？ 写出实验室鉴定淀粉、蛋白质、脂肪的方法：淀粉+______→...
\u5982\u4f55\u68c0\u6d4b\u98df\u7269\u4e2d\u7684\u86cb\u767d\u8d28\uff0c\u5728\u5b9e\u9a8c\u5ba4\u53ef\u4ee5\u505a\u7684\u5b9e\u9a8c\u90a3\u79cd\uff01\u5fae\u91cf\u51ef\u6c0f\u5b9a\u6c2e\u6cd5
\u3010\u539f\u7406\u3011
\u5c06\u6837\u54c1\u4e0e\u786b\u9178\u548c\u50ac\u5316\u5242\u4e00\u8d77\u52a0\u70ed\u6d88\u5316\uff0c\u4f7f\u86cb\u767d\u8d28\u5206\u89e3(\u6d88\u5316)\u3002\u5176\u4e2d\u7684\u78b3\u548c\u6c22\u88ab\u6c27\u5316\u6210\u4e3aCO2\u548cH2O\u9038\u51fa\uff0c\u800c\u6c28\u4e0e\u786b\u9178\u4f5c\u7528\uff0c\u751f\u6210\u786b\u9178\u94f5\u3002\u5728\u78b1\u6027\u6761\u4ef6\u4e0b\u6c28\u6e38\u79bb\uff0c\u968f\u6c34\u84b8\u6c14\u84b8\u998f\u51fa\u6765\uff0c\u88ab\u787c\u9178\u5438\u6536\uff0c\u751f\u6210\u56db\u787c\u9178\u94f5\u3002\u7528\u76d0\u9178\u6807\u51c6\u6eb6\u6db2\u6ef4\u5b9a\u751f\u6210\u7684\u56db\u787c\u9178\u94f5\u3002\u6839\u636e\u76d0\u9178\u6807\u51c6\u6eb6\u6db2\u7528\u91cf\uff0c\u8ba1\u7b97\u6c2e\u542b\u91cf\uff0c\u518d\u4e58\u4ee5\u86cb\u767d\u8d28\u7cfb\u6570\uff0c\u5373\u4e3a\u86cb\u767d\u8d28(\u7528B\u8868\u793a)\u5360\u6837\u54c1\u8d28\u91cf\u7684\u8d28\u91cf\u5206\u6570
\u6dc0\u7c89\u7684\u7279\u6027\u662f\u6dc0\u7c89\u9047\u7898\u6db2\u53d8\u84dd\u8272\uff0c\u56e0\u6b64\u53ef\u4ee5\u7528\u7898\u6db2\u6765\u68c0\u9a8c\u98df\u7269\u4e2d\u662f\u5426\u542b\u6709\u6dc0\u7c89\uff0e\u82e5\u6eb6\u6db2\u53d8\u84dd\u8272\uff0c\u8868\u660e\u98df\u7269\u4e2d\u6709\u6dc0\u7c89\uff0c\u82e5\u4e0d\u53d8\u84dd\u8272\u8868\u660e\u8be5\u98df\u7269\u4e2d\u6dc0\u7c89\u542b\u91cf\u6781\u5c11\u6216\u6ca1\u6709\uff0e\u86cb\u767d\u8d28\u662f\u6784\u6210\u4eba\u4f53\u7ec4\u7ec7\u7ec6\u80de\u7684\u57fa\u672c\u7269\u8d28\uff0c\u4eba\u4f53\u7684\u751f\u957f\u53d1\u80b2\u3001\u7ec4\u7ec7\u7684\u66f4\u65b0\u7b49\u90fd\u79bb\u4e0d\u5f00\u86cb\u767d\u8d28\uff0c\u4e5f\u80fd\u4e3a\u4eba\u4f53\u63d0\u4f9b\u80fd\u91cf\uff0c\u86cb\u767d\u8d28\u5c5e\u4e8e\u5927\u5206\u5b50\u7684\u6709\u673a\u7269\uff0c\u542b\u78b3\uff0c\u80fd\u71c3\u70e7\uff0c\u71c3\u70e7\u65f6\u6709\u4e00\u79cd\u7126\u81ed\u7684\u5473\u9053\uff0c\u9047\u5230\u9ad8\u6e29\u4f1a\u51dd\u56fa\u6210\u767d\u8272\u56fa\u6001\u7269\u8d28\uff1b\u8102\u80aa\u662f\u5907\u7528\u80fd\u6e90\uff0c\u4e00\u822c\u50a8\u5b58\u5728\u76ae\u4e0b\u5907\u7528\uff0c\u4e5f\u662f\u6709\u673a\u7269\uff0c\u4e00\u822c\u80fd\u5728\u7eb8\u5f20\u4e0a\u9762\u7559\u4e0b\u201c\u6cb9\u6591\u201d\uff0e\u6545\u7b54\u6848\u4e3a\uff1a\u7898\uff1b\u84dd\uff1b\u9ad8\u6e29\u4f1a\u51dd\u56fa\u6210\u767d\u8272\u56fa\u6001\u7269\u8d28\uff1b\u6cb9\u6591
测定蛋白质分子量的常用方法：
粘度法、凝胶过滤层析法、凝胶渗透色谱法、SDS-凝胶电泳、渗透压法、质谱法包括电喷雾离子化质谱技术和基质辅助激光解吸电离质谱技术、光散射法（多角度激光散射）、沉降法（超速离心法）。
1、粘度法
一定温度条件下，高聚物稀溶液的粘度与其分子量之间呈正相关性，随着分子量的增大，聚合物溶液的粘度增大。通过测定高聚物稀溶液粘度随浓度的变化，即可计算出其平均分子量(粘均分子量)。
如果高聚物分子的分子量愈大，则它与溶剂间的接触表面也愈大，摩擦就大，表现出的特性粘度也大。特性粘度和分子量之间的经验关系式为：
聚合物、溶剂性质有关，也和分子量大小有关。K值受温度的影响较明显，而值主要取决于高分子线团在某温度下，某溶剂中舒展的程度，其数值解在0.5～1 之间。K与的数值可通过其他绝对方法确定，例如渗透压法、光散射法等，从粘度法只能测定[η]。 在无限稀释条件下：
优缺点：该方法操作简单、设备价格较低，通常不需要标准样品，但无法测定聚合物的分子量分布。
2、凝胶过滤层析法
对同一类型的化合物，洗脱特性与组分的分子量有关，流过凝胶柱时，按分子量大小顺序流出，分子量大的走在前面。Ve与分子量的关系可用下式表示： V e=K1—K2logMr
K1与K2为常数，Mr为分子量，Ve也可用Ve—Vo（分离体积），Ve/Vo（相对保留体积），Ve/Vt（简化的洗脱体积，它受柱的填充情况的影响较小）或Kav代替，与分子量的关系同上式，只是常数不同。凝胶层析主要决定于溶质分子的大小，每一类型的化合物如球蛋白类，右旋糖酐类等都有它自己的特殊的选择曲线，可用以测定未知物的分子量，测定时以使用曲线的直线部分为宜。
优缺点：凝胶层析技术操作方便，设备简单，样品用量少，周期短，重复性能好，条件温和，一般不引起生物活性物质的变化，而且有时不需要纯物质，用一粗制品即可，目前已得到相当广泛的应用。凝胶层析法测定分子量也有一定的局限性，在pH6—8的范围内，线性关系比较好，但在极端pH时，一般蛋白质有可能因变性而偏离。糖蛋白在含糖量超过5%时，测得分子量比真实的要大，铁蛋白则与此相反，测得的分子量比真实的要小。
3、凝胶渗透色谱法
分子量的多分散性是高聚物的基本特征之一。聚合物的性能与其分子量和分子量分布密切相关。
SEC法是按分子尺寸大小分离的，即淋出体积与分子线团体积有关，利用Flory的粘度公式：
K1、K2、α1、α2可以从手册查到，从而由第一种聚合物的M-Ve校正曲线，换算成第二种聚合物的M-Ve曲线，即从聚苯乙稀标样作出的M-Ve校正曲线，可以换算成各种聚合物的校正曲线。
优缺点：凝胶渗透色谱法分离速度快、分析时间短、重现性好，进样量少、自动化程度高。但设备投入较大，价格较高。
4、SDS-凝胶电泳法
SDS是十二烷基硫酸钠的简称，它是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质与SDS的结合比为1.4gSDS/1g蛋白质），使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而使其电泳迁移率只取决于分子大小这一因素，根据标准蛋白质分子量的对数和迁移率所作的标准曲线，可求得未知物的分子量。
优缺点：实验成本较低，仪器设备也相对很简单，一套电泳装置即可。但是精确程度相对较低，好的电泳图谱需要一定的技术。
5、渗透压法
在一种理想溶液中，渗透压与溶质浓度成正比。但是实际上蛋白质溶液与理想溶液有较大的偏差。在溶质浓度不大时，它们的关系可用下式表示：
当c 趋向于0时，RTKc 趋向于0，但π/c 不趋向于0，而是趋向于一定值。测定几个不同浓度下的渗透压，以π/c对c作图，并外推至c为0时的π/c，再代入上式求得Mr。
优缺点：操作简单、快捷，实验成本低，但准确度较差，受外界温度影响较大，且要准确配置蛋白质溶液。
6、超速离心沉降法
利用超速离心沉降法测蛋白质的分子量是在较低离心转速下进行的（8000～20000r/min），离心开始时，分子颗粒发生沉降，一段时间以后，沉降的结果造成了浓度梯度，因而产生了蛋白质分子反向扩散运动，当反向扩散与离心沉降达到平衡时，浓度梯度就固定不变了。
7、光散射法
主要基于染料阴离子在蛋白质等电点前与肽链上带正电荷的基团上的结合作用.。此时生色团聚集于蛋白质分子上引起共振散射光增强，它与核酸不同的是生色团必须是带负电荷的阴离子。
光散射计算的基本公式：
8、电喷雾离子化质谱技术
电喷雾离子化质谱技术（ESI-MS）是在毛细管的出口处施加一高电压，所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴，随着溶剂蒸发，液滴表面的电荷强度逐渐增大，最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子，致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气相的质谱技术。ESI-MS 测定蛋白质大分子是根据一簇多电荷的质谱峰群，通过解卷积的方式计算得到蛋白质的分子量，由于ESI-MS可以产生多电荷峰，因此使得测试的分子质量范围大大扩大。
优缺点：（1）对样品的消耗少，不会造成样品的大量浪费；（2）对样品分子质量测试灵敏度、分辨力和准确度都相当高；（3）能够方便地与多种分离技术联用，如毛细管电泳、高效液相色谱等，是解决非挥发性、热不稳定性、极性强的复杂组分化合物的定性定量的高灵敏度检测方法。
9、基质辅助激光解吸电离质谱技术
基质辅助激光解吸电离质谱技术（MALDI-MS）是将待测物悬浮或溶解在一个基体中，基体与待测物形成混晶，当基体吸收激光的能量后，均匀传递给待测物，使待测物瞬间气化并离子化。基体的作用在于保护待测物不会因过强的激光能量导致化合物被破坏。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比，检测离子。
优缺点：（1）同ESI-MS 一样对样品的消耗很少；（2）随着质量分析器的不断改进、新的基质的不断发现和应用以及延迟萃取技术的使用，使得MALDI-MS 的最高分辨率不断提高，甚至超过ESI-MS；（3）MALDI-MS 单电荷峰占主要部分，碎片峰少，非常有利于对复杂混合物的分析，且能忍受较高浓度的盐、缓冲剂和其他难挥发成分，降低了对样品预处理的要求；（4）MALDI-TOF 质谱对生物大分子分子量的测定范围是所有测试技术中最广的。
我荣幸的告诉你，我们上星期做了这个实验：SDS—PAGE测量蛋白质相对分子质量
绛旓細娴嬪畾铔嬬櫧璐ㄥ垎瀛愰噺鐨勫父鐢ㄦ柟娉曪細绮樺害娉曘佸嚌鑳惰繃婊ゅ眰鏋愭硶銆佸嚌鑳舵笚閫忚壊璋辨硶銆丼DS-鍑濊兌鐢垫吵銆佹笚閫忓帇娉曘佽川璋辨硶鍖呮嫭鐢靛柗闆剧瀛愬寲璐ㄨ氨鎶鏈拰鍩鸿川杈呭姪婵鍏夎В鍚哥數绂昏川璋辨妧鏈佸厜鏁ｅ皠娉锛堝瑙掑害婵鍏夋暎灏勶級銆佹矇闄嶆硶锛堣秴閫熺蹇冩硶锛夈1銆佺矘搴︽硶 涓瀹氭俯搴︽潯浠朵笅锛岄珮鑱氱墿绋婧舵恫鐨勭矘搴︿笌鍏跺垎瀛愰噺涔嬮棿鍛堟鐩稿叧鎬э紝闅忕潃鍒嗗瓙閲忕殑...
绛旓細2. 绱鍒嗗厜鍏夊害娉銆傛鏂规硶涓昏鍒╃敤铔嬬櫧璐ㄥ湪鐗瑰畾娉㈤暱涓嬪惛鏀剁传澶栫嚎鐨勬ц川杩涜瀹氶噺銆傞氳繃娴嬮噺鏍峰搧鍦ㄧ壒瀹氭尝闀夸笅鐨勫惛鍏夊害锛屽彲浠ヨ绠楄泲鐧借川鐨勬祿搴︺傝繖绉嶆柟娉曞叿鏈夊揩閫熴佺伒鏁忕殑鐗圭偣锛屽箍娉涘簲鐢ㄤ簬瀹為獙瀹ゆ娴嬨3. 鍙岀缉鑴叉硶銆傚弻缂╄劜娉曟槸鍩轰簬铔嬬櫧璐ㄥ垎瀛愪腑鐨勮偨閿笌鍙岀缉鑴茶瘯鍓傚弽搴斾骇鐢熼鑹茬殑鍘熺悊鏉ュ畾閲忚泲鐧借川鐨勬柟娉曘傝...
绛旓細SDS-PAGE锛坰odium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis锛夋祴瀹氳泲鐧借川鍒嗗瓙閲锛岀畝渚裤佸揩閫熶笖閲嶅鎬уソ锛屾槸涓绉嶅父鐢ㄧ殑铔嬬櫧璐ㄥ垎瀛愰噺娴嬪畾鏂规硶銆傜櫨娉版淳鍏嬬敓鐗╃鎶鎻愪緵鍩轰簬SDS-PAGE鎴栬川璋辩殑铔嬬櫧璐ㄥ垎瀛愰噺娴嬪畾鏈嶅姟銆係DS-PAGE锛歋DS-PAGE鍗鍗佷簩鐑峰熀纭吀閽犺仛涓欑儻閰拌兒鍑濊兌鐢垫吵锛屾槸涓绉嶉棿鏂殑鐢垫吵绯荤粺锛岄氬父鐢ㄤ簬鍒...
绛旓細1. 鍑皬瀹氭爱娉 杩欐槸涓绉嶇粡鍏哥殑铔嬬櫧璐ㄦ祴瀹氭柟娉曘傝鏂规硶鍩轰簬铔嬬櫧璐ㄤ腑鐨勬爱鍚噺鐩稿绋冲畾锛岄氳繃娴嬪畾鏍峰搧涓殑姘惈閲忔潵鎺ㄧ畻铔嬬櫧璐ㄧ殑鍚噺銆傚叿浣撴楠ゅ寘鎷牱鍝佹秷鍖栥佽捀棣忋佹爱鐨勫畾閲忕瓑銆傝繖绉嶆柟娉曟搷浣滅浉瀵圭畝鍗曪紝閫傜敤浜庡ぇ閲忔牱鍝佺殑娴嬪畾銆2. 绱鍒嗗厜鍏夊害娉 姝ゆ柟娉曞熀浜庤泲鐧借川鍦ㄧ壒瀹氭尝闀夸笅鑳藉惛鏀剁传澶栧厜鐨勭壒鎬э紝閫氳繃娴嬮噺...
绛旓細鍙岀缉鑴叉硶鍩轰簬铔嬬櫧璐ㄥ垎瀛愪腑鐨勮偨閿笌鏌愪簺璇曞墏鍙戠敓鍙嶅簲锛屼骇鐢熼鑹插彉鍖栵紝閫氳繃姣旇壊娉曟潵娴嬪畾铔嬬櫧璐ㄧ殑娴撳害銆傝繖绉嶆柟娉曟搷浣滅畝渚匡紝涓斿弽搴旂伒鏁忥紝閫傜敤浜庡疄楠屽鍜岀幇鍦哄揩閫熸祴瀹氥傞厷璇曞墏娉曪紝涔熺О涓鸿冮┈鏂寒钃濇硶锛屾槸涓绉嶅揩閫熸祴瀹氳泲鐧借川鍚噺鐨勬柟娉曘傚叾鍘熺悊鏄冮┈鏂寒钃濅笌铔嬬櫧璐ㄧ粨鍚堬紝浜х敓棰滆壊鍙樺寲锛岄氳繃绱鍒嗗厜鍏夊害璁℃祴閲...
绛旓細涓銆佹杩 铔嬬櫧璐ㄥ畾閲忔柟娉曚富瑕佺敤浜庢祴瀹氭牱鍝佷腑铔嬬櫧璐ㄧ殑鍚噺銆傚父瑙佺殑铔嬬櫧璐ㄥ畾閲忔柟娉曞寘鎷鍑皬瀹氭爱娉曘佸弻缂╄劜娉曘侀厷璇曞墏娉銆佺传澶栧惛鏀舵硶浠ュ強鐢靛娉曠瓑銆備簩銆佸叿浣撴柟娉曡В閲 1. 鍑皬瀹氭爱娉 姝ゆ柟娉曟槸涓绉嶇粡鍏哥殑铔嬬櫧璐ㄥ畾閲忔柟娉曘傚叾鍘熺悊鏄湪鍌寲鍓傜殑浣滅敤涓嬶紝鍒╃敤娑堝寲娑叉秷鍖栨牱鍝侊紝浣胯泲鐧借川鍒嗚В涓虹畝鍗曠墿璐紝鐒跺悗閫氳繃...
绛旓細娴嬪畾铔嬬櫧璐ㄥ惈閲忔湁浠ヤ笅鏂规硶锛1. 鍑皬瀹氭爱娉 杩欐槸娴嬪畾鎬昏泲鐧借川鍚噺鐨勪竴绉嶇粡鍏告柟娉曘傚叾鍘熺悊鏄氳繃鍌寲鍓傛秷瑙ｆ牱鍝佷腑鐨勮泲鐧借川锛屼娇铔嬬櫧璐ㄤ腑鐨勬爱鍏冪礌閲婃斁鍑烘潵锛岀劧鍚庨氳繃鍖栧鏂规硶娴嬪畾姘惈閲忥紝浠庤岃绠楄泲鐧借川鍚噺銆傝鏂规硶鍏锋湁鍑嗙‘搴﹂珮銆佹搷浣滅浉瀵圭畝鍗曠殑鐗圭偣銆備絾鎵闇鏃堕棿杈冮暱锛岄渶瑕佷娇鐢ㄧ壒瀹氱殑鍖栧璇曞墏鍜屼华鍣ㄣ2. 鍙...
绛旓細浜屻佸弻缂╄劜娉 鍙岀缉鑴叉硶鏄竴绉嶅揩閫熴佸噯纭殑娴嬪畾铔嬬櫧璐ㄥ惈閲忕殑鏂规硶銆傝鏂规硶鍩轰簬铔嬬櫧璐ㄤ腑鐨勮偨閿笌鏌愪簺璇曞墏鍙戠敓鍙岀缉鑴插弽搴旓紝浜х敓棰滆壊鍙樺寲锛岄氳繃姣旇壊娉曟潵娴嬪畾铔嬬櫧璐ㄦ祿搴︺傝繖绉嶆柟娉曟搷浣滅畝渚匡紝骞挎硾搴旂敤浜庡疄楠屽鍜屽伐涓氱敓浜т腑銆備笁銆佺传澶栧惛鏀舵硶 绱鍚告敹娉曟槸鍒╃敤铔嬬櫧璐ㄥ湪鐗瑰畾娉㈤暱涓嬪惛鏀剁传澶栧厜鐨勬ц川鏉ユ祴瀹氳泲鐧借川鍚噺...
绛旓細19.甯哥敤浜庢祴瀹氳泲鐧借川鍒嗗瓙閲忕殑鏂规硶鏄 A銆丼DS-鑱氫笝鐑叞鑳哄嚌鑳剁數娉 B銆280/260nm绱鍚告敹姣斿 C銆佸渾浜岃壊鎬 D銆佸嚡姘忓畾姘硶 E銆佽崸鍏夊垎鍏夊厜搴︽硶 [鏈绛旀銆慉 20.鐢ㄤ簬绾寲閰跺拰鍙椾綋铔嬬櫧鐨勬渶濂芥柟娉曟槸 A銆佺洂鏋愭硶 B銆佸嚌鑳跺眰鏋 C銆佷翰鍜屽眰鏋 D銆佺瀛愪氦鎹㈠眰鏋 E銆佹湁鏈烘憾鍓傛矇娣娉 銆愭湰棰樼瓟妗堛慍 ; 宸茶禐杩 宸茶俯...
绛旓細瀹為獙瀹ゆ祴瀹鏄幏鍙铔嬬櫧璐澶у皬鏈鐩存帴鐨勬柟寮銆傞氳繃鍑濊兌鐢垫吵鎶鏈紝濡係DS-PAGE锛屽彲浠ユ牴鎹泲鐧借川鐨鍒嗗瓙閲澶у皬鍦ㄥ嚌鑳朵腑鐨勭Щ鍔ㄩ熷害鏉ュ垽瀹氬叾澶у皬銆備絾杩欑鏂规硶闇瑕佺浉搴旂殑瀹為獙瀹よ澶囧拰鎿嶄綔缁忛獙銆傛枃鐚煡闃呮柟寮 鍦ㄧ瀛︾爺绌朵腑锛屽墠浜虹殑鐮旂┒寰寰涓烘垜浠彁渚涗簡瀹濊吹鐨勭粡楠屽拰淇℃伅銆傞氳繃闃呰鐩稿叧鐨勭瀛︽枃鐚紝鎴戜滑鍙互浜嗚В鍒板凡缁忕爺绌惰繃...
