膜体系酵母双杂交载体选择攻略
膜体系酵母双杂交载体选择攻略膜体系酵母双杂选择载体是根据诱饵蛋白质定位的不同来选择，有利于互作蛋白相连的泛素NubG和Cub-LexA-VP16相互作用，被UBPs识别，从而启动下游报告基因表达。那么膜体系有哪些载体？具体要如何选择？下面小正给您支支招。
1、膜体系有哪些诱饵载体？
膜体系酵母双杂交有三种诱饵载体，分别如下：
pBT3-N
pBT3-SUC
pBT3-STE
2、如何选择载体?
根据蛋白结构域的不同，选择的载体有所区别，下表中我们总结了不同情况下适合选择的载体。
那么怎么预测蛋白的结构域呢？具体预测流程如下：
1、CDS序列翻译为氨基酸序列
https://www.novopro.cn/tools/translate.html
2、蛋白跨膜结构域预测
https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?TMHMM-2.0
3、蛋白信号肽预测
https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?SignalP-5.0
4、蛋白结构域预测
http://smart.embl-heidelberg.de/
三、膜体系筛库交付标准?
什么样的膜体系筛库结果是合格的呢？小正带您直观体验膜体系筛库的交付金标准，以使用pBT3-STE筛选膜体系文库为例，共计七大步骤和七大结论。
1、诱饵载体构建
结论1：通过一代测序比对载体是否正确。
2、诱饵载体功能验证
结论2：构建的诱饵载体是否存在移码突变，泛素特异性蛋白酶系统功能是否可以正常发挥功能，是否进行后续筛选实验。结果显示可以进行后续筛选试验。
3、自激活及毒性检测
结论3：诱饵载体pBT3-STE-XXX是否存在自激活，是否可以后续筛选实验。结果显示可以进行后续筛选试验。
4、酵母文库初筛
结论4：通过初筛共筛选到多少个单克隆。
5、对初筛结果进行复筛
结论5：通过复筛共筛选到多少个阳性克隆。
6、回转验证
结论6：对酵母阳性克隆质粒进行回转验证，确定有多少个真阳性基因。
7、点板验证
结论7：（可依据文章需求，进行个性化展示）确定是否跟回转验证结果一致。
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