酵母双杂交酵母菌株
答：酵母双杂交技术是一种在分子生物学研究中常用的技术，主要用于研究蛋白质之间的相互作用。这种技术的原理是基于真核生物的转录因子TFIID的结构，其中TFIID由TD和TBP两个亚基组成，它们之间通过一个名为helix-loop-helix的结构相互连接，形成稳定的复合物。在酵母双杂交系统中，TD和TBP被分别替换为两个目标...
答：1. 实验目的与背景 本次实验旨在构建龙须菜高温胁迫下的cDNA文库，并使用CaM作为诱饵质粒构建表达载体pGBKT-CaM。通过SMART技术将重组质粒转化到酵母菌Y187中，以研究蛋白质之间的相互作用。2. 酵母双杂交系统原理 酵母双杂交系统基于酵母转录激活因子GAL4的结构特性。GAL4包含DNA结合域（BD）和转录激活域...
答：这项技术的关键是报道基因URA3的引入。URA3基因在这里起到了反选择的作用, 它编码的酶是尿嘧啶合成的关键酶。该酶能把5-氟乳清酸(5-FOA)转化成对细胞有毒的物质。Vidal等人通过改造在URA3基因的启动子内引入Gal4的结合位点。这个改造的酵母菌株在缺乏尿嘧啶的选择性培养基上只有当“诱饵”和“猎物...
答：100字有点困难，但是还是可以试试，如果有疑问可以追问。酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段。实验中将A蛋白与转录激活因子连接，B蛋白与另一个转录因子（比如RNA聚合酶的alpha亚基）融合。如果A能够和B发生互作，那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录，从而使菌株产生某些特性（抗性或...
答：呵呵，我做Y2H很久了。pGBKT7和pGADT7不要同时转入细胞，要先转入一个，平板培养，挑单菌落做液体培养，再转入另一个质粒，同时转入两个质粒的效率太低。我做的时候转化率很高，从来没有出现过问题，转入第一个质粒（pGBKT7）通常在SD-Trp平板上可以有3000-4000个菌落，再转入pGADT7后，在双选择...
答：注意事项 （1）酵母双杂交对照的设定 常规的酵母双杂交操作时一般会设定阳性对照、阴性对照以及显色系统对照三种对照，以MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统为例：阳性对照：pGADT7-T + pGBKT7-53，其中T蛋白和53蛋白是已经明确在酵母细胞内能够发生结合并启动报告基因表达的两种蛋白。阴性对照：pGADT7-...
答：前者可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游，转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用，启动它所调节的基因的转录。两个结构域不但可在其连接区适当部位打开， 仍具有各自的功能。而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的...
答：酵母单杂交系统和双杂交系统是两种常用的蛋白质相互作用检测方法，它们的主要区别在于检测的原理和应用范围不同。酵母单杂交系统Y1H（Yeast One Hybrid System）用于发现DNA序列与转录因子结合的技术。该系统通过将感兴趣的DNA序列插入到启动子上游的启动子活化区域AD（Activation Domain）所编码的报告基因前，...
答：在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选大的、新鲜的克隆进行培养，经过离心和重悬后，再使用血球计对细胞进行计数。密度应该在1 x 109/ml。一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻毒性，同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平...
网友评论：
钦杨18468009724：
酵母双杂交系统到底是啥回事?有啥用 -
19705谈郊
： 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
钦杨18468009724：
酵母宿主细胞AH109和Y190有什么区别 -
19705谈郊
： 酵母宿主细胞AH109和Y190主要是筛选方式和用途的侧重点不同酵母宿主细胞AH109株为色氨酸营养缺陷,可作为蛋白真核表达系统,也可用于酵母双杂交. 酵母菌株Y190更多用于酵母双杂交.
钦杨18468009724：
酵母菌双杂交到底是什么? 请解释一下 -
19705谈郊
： 100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问.酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段.实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合.如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或能够在基本培养基上生长),反之则不能.参考资料:http://baike.baidu.com/link?url=gzze1wAVvxbMwPcV8xUjouZsKo1gCjEVnSCm7QeV0m-3CW_1od9IqgWbY25byn91OzKfM5kGeMRah5KdaccKta
钦杨18468009724：
酵母双杂交的具体过程是什么?(中文) -
19705谈郊
： 菌株与质粒AH109酵母菌株(MATa,trp1. 901,leu2—3,112,ura3-52,his3-200,gal4A,gal8O~X, LYS2::G地1U^s-GALlT^T^-HIS3, G U^s—GAI2T^T^- ADE2,URA3::h吐1U^s.h吐1T^T^.1acZ),YM187酵母 菌株(NATQ,um3-52,his3-200,ade2—101,trpl-...
钦杨18468009724：
酵母双杂交系统的介绍 -
19705谈郊
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
钦杨18468009724：
关于酵母双杂交SYSTEM3的AH109菌株 -
19705谈郊
： 呵呵,我做Y2H很久了.pGBKT7和pGADT7不要同时转入细胞,要先转入一个,平板培养,挑单菌落做液体培养,再转入另一个质粒,同时转入两个质粒的效率太低.我做的时候转化率很高,从来没有出现过问题,转入第一个质粒(pGBKT7...
钦杨18468009724：
酵母双杂交的常见问题 -
19705谈郊
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
钦杨18468009724：
酵母双杂交系统原理的优点 -
19705谈郊
： 双杂交系统的另一个重要的元件是报道株.报道株指经改造的、含报道基因(reporter gene)的重组质粒的宿主细胞. 最常用的是酵母细胞, 酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点: 〈1〉 易于转化、便于回收扩增质粒. 〈2〉...
钦杨18468009724：
酵母双杂交的特点 -
19705谈郊
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
钦杨18468009724：
酵母双杂交 - 酵母双杂交两种菌杂交效率不高有哪些原因?
19705谈郊
： 酵母双杂交技术研究进展 张迪 霍克克 顾科隆 赵翔 李育阳 提 要 酵母双杂交技术是一种有效的真核活细胞内研究方法,在蛋白质相互作用的研究方面得到了广泛的应用并取...
