酵母双杂交实验详细步骤
答：6） 根据每个转化需要50μl 菌液的量加入1XTE/LiAc 重悬菌体，分装到 Eppendorf 管中，每管50μl 菌液。7） 每管加约100ng Bait 基因质粒，5μl 预变性的Carrier DNA*，500μl 1X TE/LiAc/PEG*。8） 放置于30℃培养箱或者水浴中孵育30 分钟,15 分钟时混匀一次。9） 30 分钟后，每管...
答：白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。把原来spaces空间上的一篇蛋白质与蛋白质间相互作用研究方法转来，算是实验技巧分类目录的首篇。\x0d\x0a\x0d\x0a一、酵母双杂交系统\x0d\x0a酵母双杂交系统是...
答：酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因。酵母双杂交系统检测蛋白之间的相互作用具有以下优点: ⑴ 作用信号是在融合基因表达后， 在细胞内重建转录因子的作用而给出的， 省去了纯化蛋白质的繁琐步骤。⑵ 检测在活细胞内进行， 可以...
答：Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型，将前者与Gal4的BD结构域融合，另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”（bait）和“猎物”或靶蛋白（prey or target protein）。如果在Snf1和Snf2之间...
答：膜体系酵母双杂交载体选择攻略 膜体系酵母双杂选择载体是根据诱饵蛋白质定位的不同来选择，有利于互作蛋白相连的泛素NubG和Cub-LexA-VP16相互作用，被UBPs识别，从而启动下游报告基因表达。那么膜体系有哪些载体？具体要如何选择？下面小正给您支支招。1、膜体系有哪些诱饵载体？膜体系酵母双杂交有三种诱饵...
答：注意事项 （1）酵母双杂交对照的设定 常规的酵母双杂交操作时一般会设定阳性对照、阴性对照以及显色系统对照三种对照，以MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统为例：阳性对照：pGADT7-T + pGBKT7-53，其中T蛋白和53蛋白是已经明确在酵母细胞内能够发生结合并启动报告基因表达的两种蛋白。阴性对照：pGADT7-...
答：蛋 白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。把原来spaces空间上的一篇蛋白质与蛋白质间相互作用研究方法转来，算是实验技巧分类目录的首篇。 一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学...
答：探索蛋白质世界的神秘链接，揭示生命机制的关键所在，科学家们依赖一系列精湛的方法来揭示蛋白质之间的相互作用。首先，让我们深入了解一下：酵母双杂交系统</：这一快速而高效的工具，如同生物界的侦探，通过观察酵母细胞内的荧光信号，瞬间揭示出潜在的蛋白质伙伴，为新功能的发现打开了一扇窗。免疫共沉淀...
答：回答：与题目不符,但希望能作为参考 一、实验原理酵母菌的生活史属于双单性类型,它们的单倍体细胞和二倍体细胞一般都能进行无限制的分裂。以单倍体细胞为主的酵母菌称为单倍体酵母,例如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharamycespombe)。以二倍体细胞为主的酵母菌称为二倍体酵母,如啤酒酵母(又称面包酵母,...
答：将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；再将文库质粒转化到酵母中。通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白，从酵母中分离质粒然后转化E. coli ，从大肠杆菌中提取质粒并测序 ，在数据库中比对所测定序列与...
网友评论：
戚呢18622308827：
酵母双杂交的具体过程是什么?(中文)
13397白显
： 菌株与质粒AH109酵母菌株(MATa,trp1. 901,leu2—3,112,ura3-52,his3-200,gal4A,gal8O~X, LYS2::G地1U^s-GALlT^T^-HIS3, G U^s—GAI2T^T^- ADE2,URA3::h吐1U^s.h吐1T^T^.1acZ),YM187酵母 菌株(NATQ,um3-52,his3-200,ade2—101,trpl-...
戚呢18622308827：
谁能解释一下酵母双杂交系统的基本原理和操作流程 -
13397白显
： 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统,也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法.该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.
戚呢18622308827：
酵母双杂交实验有哪些注意事项 -
13397白显
： 如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办?在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好.首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起.用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应.2.如果诱饵蛋白能直接激活报告基因的表达,该如何处理?该蛋白很可能有转录激活域,是个转录因子.可以通过基因重组切掉转录激活域,然后重新检测其是否自激活,但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作.
戚呢18622308827：
如何用酵母双杂交系统探究蛋白质的功能 -
13397白显
： 大多数双杂交系统往往同时使用两个甚至三个报道基因, 其中之一是LacZ. 这些改造后的基因在启动子区有相同的转录激活因子结合位点, 因此可以被相同的转录激活因子(如上述的Gal4蛋白)激活. 通过这种双重或多重选择既提高了检测灵...
戚呢18622308827：
酵母菌双杂交到底是什么? 请解释一下 -
13397白显
： 100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问.酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段.实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合.如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或能够在基本培养基上生长),反之则不能.参考资料:http://baike.baidu.com/link?url=gzze1wAVvxbMwPcV8xUjouZsKo1gCjEVnSCm7QeV0m-3CW_1od9IqgWbY25byn91OzKfM5kGeMRah5KdaccKta
戚呢18622308827：
酵母双杂交的常见问题 -
13397白显
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
戚呢18622308827：
酵母双杂酵母感受态可以不大摇吗根据Clonetech公司的步骤?
13397白显
： 酵母双杂交试验中,进行酵母转化时要先做酵母感受态,这里进行的YPD培养液振荡培养... 我最近就是单杂+双杂...个人感觉比较喜欢在摇床里摇,水浴的话菌都沉下去
戚呢18622308827：
酵母双杂交系统的介绍 -
13397白显
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
戚呢18622308827：
酵母双杂文库筛选出互作蛋白,然后再怎么做 -
13397白显
： 然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用. 比如: 1、诱饵蛋白表达载体 2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性,毒性检测 3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告 4、 无相互作用时诱饵...
