酵母杂交的方法
答：酵母双杂交的操作步骤如下：1.构建酵母双杂交载体 首先需要构建酵母双杂交载体，该载体包含两个重要的部分：一个携带蛋白质结构域的DNA结合域和一个携带转录激活域的DNA结合域。2.将两个蛋白质结构域克隆到载体中 将两个蛋白质结构域克隆到载体中，一个蛋白质结构域与转录激活域相连，另一个蛋白质结构...
答：具体实验步骤如下：1.构建酵母表达载体：将含有自身复制元件2μ、酵母转录起始序列、选择性筛选的标记基因等元件的酵母表达载体与感兴趣的蛋白质基因融合，在表达载体中得到融合基因。2.构建Gal4转录因子启动子激活报告基因的表达载体：将报告基因与Gal4转录因子启动子串联，在表达载体中得到表达Gal4转录因子...
答：具体操作步骤如下：1.选取两个酵母菌株，分别使其携带不同的标记基因，如抗生素耐药基因或荧光蛋白基因等。2.将两个酵母菌株混合培养，促进它们之间的杂交。3.分离出杂交子代，筛选出含有两种标记基因的酵母菌株。4.观察这些酵母菌株的表型及遗传标记的遗传分布情况，并与单杂交控制组对比，进行分析。通过...
答：最后，通过观察和测量酵母细胞内的报告基因表达情况，可以筛选出与诱饵蛋白结合并激活报告基因的蛋白质。这些蛋白质即被认为是与待测基因有相互作用的候选蛋白。通过这种方式，酵母双杂交系统为我们揭示了细胞内的蛋白质相互作用网络，对于理解生物学过程和疾病机制具有重要意义。
答：选择适当的酵母双杂交系统：常用的酵母双杂交系统包括Gal4系统和LexA系统。选择适合你实验需要的系统。设计诱饵序列：诱饵是你感兴趣的蛋白质，可以是全长蛋白或其特定区域。选择一个适当的片段，通常是在蛋白质的N端或C端添加一段活化域，例如Gal4 DNA结合域。扩增诱饵基因：使用PCR等方法从适当的模板（...
答：酵母单杂交(yeast one hybrid)技术是体外分析DNA与细胞内蛋白质相互作用的一种方法，通过对酵母细胞内报告基因表达状况的分析，来鉴别DNA结合位点并发现潜在的结合蛋白基因，或对DNA结合位点进行分析. 运用此技术，能筛选到与DNA结合的蛋白质，并可直接从基因文库中得到编码该蛋白质的核苷酸序列，而无需复杂...
答：在酵母双杂交系统中，TD和TBP被分别替换为两个目标蛋白，一个是诱饵蛋白（bait protein），另一个是猎物蛋白（prey protein）。这两个蛋白分别插入到酵母细胞的两段DNA序列中，这两段DNA序列分别是激活子和报道基因。如果诱饵蛋白和猎物蛋白能够相互作用，它们就会形成一个功能性的转录因子，从而激活报道...
答：酵母双杂交系统 真核生物转录调控因子具有组件式结构 (modular) 特征，这些蛋白往往由两个或两个以上相互独立的结构域， 其中DNA结合结构域( binding domain， BD)和转录激活结构域( activation domain， AD)是转录激活因子发挥功能所必须的。BD能与特定基因启动区结合，但不能激活基因转录，由.不同转录...
答：质粒在双杂交实验中充当载体，其筛选标记通常是特定氨基酸缺陷或抗生素敏感性。酵母菌株的选择则依赖于实验类型，如酿酒酵母中的MATa型（如Y2HGold）和MATα型（如Y187）可通过融合（mating）或质粒共转来实现不同蛋白的测试。实验方法选择 一般情况下，若文库为质粒形式，BD与AD-cDNA文库会共同转化到Y2H...
答：酵母双杂交法的原理：典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分...
网友评论：
毋独17691131943：
酵母单杂交的介绍 -
60101隆胞
： 酵母单杂交技术是一种研究蛋白质和特定DNA序列相互作用的技术方法,主要包括四个流程即:一、筛选含有报告基因的酵母单细胞株;二、构建表达文库;三、重组质粒转化至酵母细胞;四、阳性克隆菌株的筛选.
毋独17691131943：
求面包酵母和酿酒酵母杂交的实验方案,谢谢! -
60101隆胞
： 我曾做个原生质体融合试验可能对你有用,用溶菌酶去掉细胞壁,分离,在高渗液下得到原生质体,将两母株进行原生质体融合得融合子,在选择性培养基下鉴定出融合子,重重点在两母株的标记,以确认融合子具有两母株的特征.
毋独17691131943：
酵母双杂交的具体过程是什么?(中文) -
60101隆胞
： 菌株与质粒AH109酵母菌株(MATa,trp1. 901,leu2—3,112,ura3-52,his3-200,gal4A,gal8O~X, LYS2::G地1U^s-GALlT^T^-HIS3, G U^s—GAI2T^T^- ADE2,URA3::h吐1U^s.h吐1T^T^.1acZ),YM187酵母 菌株(NATQ,um3-52,his3-200,ade2—101,trpl-...
毋独17691131943：
酵母菌双杂交到底是什么? 请解释一下 -
60101隆胞
： 100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问.酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段.实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合.如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或能够在基本培养基上生长),反之则不能.参考资料:http://baike.baidu.com/link?url=gzze1wAVvxbMwPcV8xUjouZsKo1gCjEVnSCm7QeV0m-3CW_1od9IqgWbY25byn91OzKfM5kGeMRah5KdaccKta
毋独17691131943：
酵母双杂交的常见问题 -
60101隆胞
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
毋独17691131943：
谁能解释一下酵母双杂交系统的基本原理和操作流程 -
60101隆胞
： 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统,也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法.该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.
毋独17691131943：
酵母双杂交的局限性 -
60101隆胞
： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
毋独17691131943：
论述酵母双杂交技术的原理和应用情况 -
60101隆胞
：[答案] 酵母双杂交技术研究进展张迪 霍克克 顾科隆 赵翔 李育阳提 要 酵母双杂交技术是一种有效的真核活细胞内研究方法,在蛋白质相互作用的研究方面得到了广泛的应用并取得了许多有价值的重要发现.作为一个完整的实验系统,...
毋独17691131943：
酵母单杂交方法分析转录激活活性的原理和过程 -
60101隆胞
： 0 引言酵母单杂交(yeast one hybrid)技术是体外分析DNA与细胞内蛋白质相互作用的一种方法,通过对酵母细胞内报告基因表达状况的分析,来鉴别DNA结合位点并发现潜在的结合蛋白基因,或对DNA结合位点进行分析. 运用此技术,能筛选...
