膜系统酵母双杂交
答：Vidal等人发展了所谓的逆双杂交系统（reverse two-hybrid system）。这项技术的关键是报道基因URA3的引入。URA3基因在这里起到了反选择的作用, 它编码的酶是尿嘧啶合成的关键酶。该酶能把5-氟乳清酸(5-FOA)转化成对细胞有毒的物质。Vidal等人通过改造在URA3基因的启动子内引入Gal4的结合位点。这个...
答：最近做酵母双杂交,筛选到12个阳性克隆,编码同一个基因,但是翻译不通,请高手如何解释?载体是clontech 首先谢谢各位老师的回答。用的菌株是clontech的Y2HGOLD菌株,是他们公司新开发的。我们挑选的阳性克隆是既能显色,又能在四缺板加毒素AbA,和16mM的3-AT.经测序他们是5个不同的克隆,但... 首先谢谢各位老师的...
答：一般采用膜检的方法，检测LacZ 基因的表达情况。膜检方法如下:1) 将阳性克隆菌落影印于滤纸上。2) 将滤纸完全浸于液氮中，时间长于30 秒，取出后晾干。3) 培养皿加入适量显色液*(新鲜配制)，垫一层滤纸，让其完全湿润，将冻溶 后的滤纸铺在上面，使显色液渗透到表层。9cm 培养皿加2ml 显色液...
答：为了克服上述缺点，人们进一步优化出所谓“双 筛选系统”，即蛋白质相互作用必须同时激活两个 以上报道基因，具有两种以上的相应表型才算是真 的阳性结果。另外，人们也改造了酵母双杂交系统 所用的载体系统，将在细胞浆内发生的蛋白质相互 作用转移到细胞膜上进行，以此来更容易地筛选膜 蛋白受体，如Ras ...
答：GST pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE...
答：AD载体一般没有核定位信号，BD有 但是质膜蛋白的互作可能依赖翻译后修饰，所以两个蛋白都入核也不一定能互作，即使自然条件下它们是互作的
答：1、酵母双杂交系统原理不同转录激活因子的DB和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能 ,酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白-蛋白的相互作用2、酵母单杂交原理将已知的顺式作用元件构建到最基本启动子(Pmin)上游,把报告基因连接到Pmin下游。将待测转录因子的cDNA与酵母转录激活结构域(AD...
答：目前，酵母双杂交及其衍生技术已被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域，成为分子生物学研究领域的重要实验手段，同时国内外科研工作者通过该技术揭示了大量已知或者未知蛋白相互作用的分子机制。正和生物致力于科研的最前沿，在构建核体系酵母文库和膜体系酵母文库均有丰富的经验，熟练运用...
答：2005.2,MATCHMAKER LexA酵母双杂交系统,酵母SD培养基,SD/, SD/,5:2005?05,电子信箱:[email protected]神经元蜡样脂褐质沉积症 (neuronal ceroid lipofuscinoses,其它化学试剂均为国内购买。测序公司为上海生工生物工程技术服务有限公司。1.2方法1:Herp与Bax inhibitor?1相互作用,Bax inhibitor?1具有调节凋亡特性,...
答：2000年初，《Science》登载了一篇应用蛋白质组学的大规模双杂交技术研究线虫生殖器发育的文章[14]。在这个工作中，Walhout等以线虫的生殖发育过程作为研究对象，从已知的27个与线虫发育的蛋白质出发，构造了一个大规模的酵母双杂交系统，得到了100多个相互作用的结果，初步建立了与线虫生殖发育相关的蛋白质...
网友评论：
邱娥18967516206：
酵母双杂交系统到底是啥回事?有啥用 -
54745屠茜
： 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
邱娥18967516206：
酵母双杂交的特点 -
54745屠茜
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
邱娥18967516206：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
54745屠茜
： 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号放大;④检测的结果是基因表达产物的累积效应,可检测存在于蛋白质间的微弱或暂时的相互作用.2、真实性.检测在活细胞内进行,作用条件与作用力无需模拟,在一定程度上代表细胞内的真实情况.3、简洁性.融合蛋白相互作用后,减少了制备抗体和纯化蛋白质的繁琐步骤. 3、广泛性.采用不同组织器官细胞类型和分化时期的材料构建cDNA文库,能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质,适用于部分细胞质、细胞核及膜结合蛋白.
邱娥18967516206：
酵母双杂交系统原理的应用 -
54745屠茜
： 酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用,具有高度敏感性. 主要是由于: ①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达. ②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行, 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤,降低了信号强度. ③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强,后者又与启动子DNA结合, 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定. ④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大. 同时, 酵母表型, X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感.
邱娥18967516206：
酵母双杂交的局限性 -
54745屠茜
： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
邱娥18967516206：
酵母双杂交系统的介绍 -
54745屠茜
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
邱娥18967516206：
为什么 膜蛋白 不容易做酵母双杂交 -
54745屠茜
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
邱娥18967516206：
谁能解释一下酵母双杂交系统的基本原理和操作流程 -
54745屠茜
： 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统,也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法.该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.
邱娥18967516206：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
54745屠茜
：[答案] 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号...
邱娥18967516206：
酵母单杂交系统与酵母双杂交系统的异同点? -
54745屠茜
： 酵母双(单)杂交系统:Y2H膜蛋白系统;Grow' ' n' ' Glow GFP酵母单(双)杂交系统;Grow´ n´ Glow ACE1酵母双杂交系统;Y2H膜蛋白系统cDNA文库;酵母载体;酵母菌;酵母转化和质粒提取;β -半乳糖苷酶活性检测试剂盒; 噬菌体展示:pSKAN噬菌体展示系统;Anti-plll (g3p)抗体;抗体;pSKAN8载体;pMAMPF3-PSTI4载体;Lambda PS噬菌体裂解物;Anti-hPSTI 基因文库:Y2H cDNA文库;Lambda PS基因文库;
