酵母双杂交载体
答：因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。发现新的蛋白质和蛋白质的新功能酵母双杂交技术已经成为发现新基因的主要途径。当我们将已知基因作为诱饵，在选定的cDNA文库中筛选与诱饵蛋白相互作用的蛋白，从筛选到的阳性酵母菌株中可以分离得到AD-LIBRARY载体，并从载体中进一步克隆得到随机插入的cDNA片段，并...
答：在酵母双杂交的应用中有时也会遇到假阴性现象。所谓假阴性，即两个蛋白本应发生相互作用，但报告基因不表达或表达程度甚低以至于检测不出来〔4〕。造成假阴性的原因主要有两 方面：一是融合蛋白的表达对细胞有毒性。这时应该选择敏感性低的菌株或拷贝数低的载体。二是蛋白间的相互作用较弱，应选择高敏感...
答：要看载体上的BD序列在MCS的上游还是下游。若在上游，无需去除，若在下游，必须去除。
答：酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子（如GAL4等）的DNA结合结构域基因和转录激活因子（如GAL4等）激活结构域基因，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。
答：单独的BD虽然能和启动子结合，但是不能激活转录。而不同转录激活因子的BD和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能。如酵母细胞的Gal4蛋白的BD与大肠杆菌的一个酸性激活结构域B42融合得到的杂合蛋白仍然可结合到Gal4结合位点并激活转录。在酵母双杂交系统中，“诱饵”蛋白X克隆至DNA-BD载体中，...
答：最近在做龙须菜高温胁迫表达cDNA文库的构建，选择的是CaM做诱饵质粒构建表达载体pGBKT-CaM，利用SMART技术将重组质粒转化到酵母菌Y187中，搜集了部分资料找到了一份比较全的酵母双杂交实验操作步骤。一.酵母双杂交系统的原理 酵母的转录激活因子GAL4由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域(domain)组成，N...
答：酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质分别克隆（融合)到酵母表达质粒的转录激活域(如GAL4等)的DNA结合结构域(DNA-BD)和转录激活域(AD)上，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法，是根据载体的遗传特征筛选重组子。蓝白斑筛选主要为基因互补与...
答：最近做酵母双杂交,筛选到12个阳性克隆,编码同一个基因,但是翻译不通,请高手如何解释?载体是clontech 首先谢谢各位老师的回答。用的菌株是clontech的Y2HGOLD菌株,是他们公司新开发的。我们挑选的阳性克隆是既能显色,又能在四缺板加毒素AbA,和16mM的3-AT.经测序他们是5个不同的克隆,但... 首先谢谢各位老师的...
答：6.cDNA与酵母双杂交文库载体(pGADT7或者pDEST22)进行all-direct重组 7.重组产物电转化 8.文库检测以及质粒提取 3.1 All-direct方法与SMART方法的比较与优势 3.2 All-direct方法与Gateway方法的比较与优势 25个工作日内,如需转化酵母延长15个工作日。 备注1:该酵母文库可以选择增加均一化处理步骤,我们使用DSN法...
网友评论：
乔张17724063503：
酵母双杂交系统的介绍 -
64600毛沸
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
乔张17724063503：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
64600毛沸
： 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号放大;④检测的结果是基因表达产物的累积效应,可检测存在于蛋白质间的微弱或暂时的相互作用.2、真实性.检测在活细胞内进行,作用条件与作用力无需模拟,在一定程度上代表细胞内的真实情况.3、简洁性.融合蛋白相互作用后,减少了制备抗体和纯化蛋白质的繁琐步骤. 3、广泛性.采用不同组织器官细胞类型和分化时期的材料构建cDNA文库,能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质,适用于部分细胞质、细胞核及膜结合蛋白.
乔张17724063503：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
64600毛沸
：[答案] 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号...
乔张17724063503：
酵母单杂交系统与酵母双杂交系统的异同点? -
64600毛沸
： 酵母双(单)杂交系统:Y2H膜蛋白系统;Grow' ' n' ' Glow GFP酵母单(双)杂交系统;Grow´ n´ Glow ACE1酵母双杂交系统;Y2H膜蛋白系统cDNA文库;酵母载体;酵母菌;酵母转化和质粒提取;β -半乳糖苷酶活性检测试剂盒; 噬菌体展示:pSKAN噬菌体展示系统;Anti-plll (g3p)抗体;抗体;pSKAN8载体;pMAMPF3-PSTI4载体;Lambda PS噬菌体裂解物;Anti-hPSTI 基因文库:Y2H cDNA文库;Lambda PS基因文库;
乔张17724063503：
酵母双杂交系统到底是啥回事?有啥用 -
64600毛沸
： 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
乔张17724063503：
连接pgbkt7载体转化到什么感受态 -
64600毛沸
：[答案] pgbkt7是酵母双杂交用的载体.你要是改造、扩增载体,就转普通的感受态就可以了,什么TOP10、DH5α都可以.要是你要进行酵母双杂交实验了,那就转化酵母的感受态细胞,比如Y2HGold、AH109等.
乔张17724063503：
酵母双杂交的常见问题 -
64600毛沸
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
乔张17724063503：
酵母双杂交的局限性 -
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： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
乔张17724063503：
酵母双杂交系统原理的应用 -
64600毛沸
： 酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用,具有高度敏感性. 主要是由于: ①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达. ②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行, 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤,降低了信号强度. ③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强,后者又与启动子DNA结合, 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定. ④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大. 同时, 酵母表型, X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感.
