酵母双杂交筛库
答：我们是国内极少数能同时提供文库构建和文库筛选的公司,对于酵母双杂交筛选服务,您只需要提供诱饵基因序列即可,我们会进行以下工作,筛选的报价为3万元整: 1.诱饵载体的测序验证以及构建到双杂交筛选载体上 2.诱饵基因的自激活检测,检测通过后继续下一步实验。 3.诱饵质粒转化酵母细胞,验证合格后再转化文库质粒 4.酵母...
答：可能你挑选的阳性克隆是杂菌或假阳性。建议你再重复试验一次，并做好阳性对照和阴性对照
答：1、膜体系有哪些诱饵载体？膜体系酵母双杂交有三种诱饵载体，分别如下：pBT3-N pBT3-SUC pBT3-STE 2、如何选择载体?根据蛋白结构域的不同，选择的载体有所区别，下表中我们总结了不同情况下适合选择的载体。那么怎么预测蛋白的结构域呢？具体预测流程如下：1、CDS序列翻译为氨基酸序列 https://www.n...
答：可参考：诱饵基因转化筛库宿主菌Y190 1） 3 个1mm 克隆接种于3mlYPD 液体培养基30℃振荡培养20 小时(过夜)，OD600 达到1.2 左右。2） 将此3ml 菌液接入大体积(体积视转化个数定)YPD 中培养4 小时左右，使 培养液OD600 达到0.6。3） 50ml 离心管收集菌液(Falcon, BD)，Eppendorf Centrifuge 5...
答：酵母双杂交，营养缺陷培养基长出菌落，但提质粒 发展起来的各种双杂交系统大多是以Fields等人建立的系统为基础的。这些新系统主要对报道基因、“诱饵”表达载体以及“猎物”表达载体等做了一些改进。其中一个重要改进是引入额外的报道基因，如广泛采用的HIS3基因。经过改造带有HIS3报道基因的酵母细胞，只有当...
答：摘要: HAP转录因子(HAP2/HAP3/HAP4/HAP5) 是存在于酿酒酵母中的一种异源多聚蛋白,它能与酵母中许多启动子上游的CCAAT盒(顺式作用元件)专一性结合, 以增强基因的转录。在酵母hap5突变株的细胞中,用酵母单杂交系统从水稻cDNA-GAL4表达文库中筛选出的阳性克隆是编码谷胱甘肽氧还蛋白的cDNA,提示细胞内的氧化还原系...
网友评论：
苗顾18452377252：
酵母双杂交的常见问题 -
5362宗欣
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
苗顾18452377252：
酵母双杂文库筛选出互作蛋白,然后再怎么做 -
5362宗欣
： 然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用. 比如: 1、诱饵蛋白表达载体 2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性,毒性检测 3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告 4、 无相互作用时诱饵...
苗顾18452377252：
酵母双杂交的局限性 -
5362宗欣
： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
苗顾18452377252：
酵母双杂交系统的介绍 -
5362宗欣
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
苗顾18452377252：
酵母双杂交错用了pGADT7 - rec2对结果有没有影响 -
5362宗欣
： 注意事项 (1)酵母双杂交对照的设定 常规的酵母双杂交操作时一般会设定阳性对照、阴性对照以及显色系统对照三种对照,以MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统为例: 阳性对照:pGADT7-T + pGBKT7-53,其中T蛋白和53蛋白是已经...
苗顾18452377252：
请问 酵母双杂筛库在四缺培养基上显蓝斑后,提取prey(猎物质粒)时应用什么培养基摇菌比较好?为什么? -
5362宗欣
： 因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长.如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果不能互作,就不生长.
苗顾18452377252：
酵母双杂交的特点 -
5362宗欣
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
苗顾18452377252：
酵母双杂交,bait如何构建 -
5362宗欣
： 可参考:诱饵基因转化筛库宿主菌Y190 1) 3 个1mm 克隆接种于3mlYPD 液体培养基30℃振荡培养20 小时(过夜), OD600 达到1.2 左右. 2) 将此3ml 菌液接入大体积(体积视转化个数定)YPD 中培养4 小时左右,使 培养液OD600 达到0.6...
苗顾18452377252：
酵母双杂交筛库不加3 - at有什么影响 -
5362宗欣
： 假阳性 非常多,你是 -LWH 3缺+ 3-AT 吗?
苗顾18452377252：
酵母双杂交系统原理的应用 -
5362宗欣
： 酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用,具有高度敏感性. 主要是由于: ①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达. ②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行, 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤,降低了信号强度. ③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强,后者又与启动子DNA结合, 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定. ④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大. 同时, 酵母表型, X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感.
