酵母双杂四缺上不长
答：最近做酵母双杂交,筛选到12个阳性克隆,编码同一个基因,但是翻译不通,请高手如何解释?载体是clontech 首先谢谢各位老师的回答。用的菌株是clontech的Y2HGOLD菌株,是他们公司新开发的。我们挑选的阳性克隆是既能显色,又能在四缺板加毒素AbA,和16mM的3-AT.经测序他们是5个不同的克隆,但... 首先谢谢各位老师的...
答：啤酒酵母的菌落红酵母的菌落各种酵母菌的菌落。[编辑本段]【生殖】 酵母可以通过出芽进行无性生殖,也可以通过形成子囊孢子进行有性生殖。无性生殖即在环境条件适合时,从母细胞上长出一个芽,逐渐长到成熟大小后与母体分离。在营养状况不好时,一些可进行有性生殖的酵母会形成孢子(一般是四个),在条件适合时再萌发...
答：一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因在酵母细胞内的表达，如果检测到报道基因的表达产物，则说明两者之间有相互作用，反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化...
答：4、修饰语与中心语搭配不当。如: (15)他在培育良种方面花了很大的心血。(“很大”应改为“很多”。) (16)自己有双聪明能干的手,什么都造出来。(“聪明能干”应改为“灵巧”。) (17)这次大会上,对工资问题交换了广泛的意见。(应改为“广泛地交换了”。) 5、一面与两面搭配不当。如: (18)学习成绩的...
答：经过偶联的与在线连接的离子阱质谱分析，给出肽片段的精确的氨基酸序列,但是 分析时间一般较长。 目前，许多实验室两种质谱方法连用，获得有意义的蛋白质的肽段序列，设计探针或引物来获得有意义的基因。随着蛋白质组研究的深入，又有多种新型质谱仪出现，主要是在上述质谱仪的基础上进行改进与重新组合。
答：4、修饰语与中心语搭配不当。如: (15)他在培育良种方面花了很大的心血。(“很大”应改为“很多”。) (16)自己有双聪明能干的手,什么都造出来。(“聪明能干”应改为“灵巧”。) (17)这次大会上,对工资问题交换了广泛的意见。(应改为“广泛地交换了”。) 5、一面与两面搭配不当。如: (18)学习成绩的...
答：同酵母双杂交实验一样,运用此法也可以证明相互作用的蛋白分子中是否有参与调节作用的结构域或 motif。GST 沉淀实验原理就是,把你要研究的蛋白基因亚克隆到带有GST(谷胱甘肽转移酶)基因的原核表达载体中,并在细菌中表达 GST 融合蛋白(GST-X)。把 GST 融合蛋白挂到带有 GST 地物的 Sepharose beads 上,然后把另一...
答：(“局面”是“条件”不妥,可删去“的局面”。) 4、修饰语与中心语搭配不当。如: (15)他在培育良种方面花了很大的心血。(“很大”应改为“很多”。)(16)自己有双聪明能干的手,什么都造出来。(“聪明能干”应改为“灵巧”。)(17)这次大会上,对工资问题交换了广泛的意见。(应改为“广泛地交换了”。) ...
答：往往由于宾语前的定语太长,使得中心语残缺。 ④定语、状语缺少或者不完整。 ⑤缺少关联词语。 例如: 这个集团目前已成为拥有11个专业公司、2个研究所、3个生产厂,现有固定资产8500万元。 (这个句子的谓语“拥有”什么,残缺。应补上宾语“的大型企业”。) (四)成分赘余 ①主语有多余成分;②谓语有多余成分;...
答：藏的艺术上的灵感和才华。天秤座的人需要别人的钦佩和赞扬，只有在他感到欣然的环境中 ，他才能无忧无虑地生活。他喜欢到商店中去消磨自己的时间，选购 好玩的和供观赏用的小礼物，赠送给自己的知心朋友。他不愿意在缺 乏温暖和热情的环境中生活。一旦他病倒了，便会感到异常不幸并沉 溺在失望之中。...
网友评论：
皇眨18590959954：
酵母双杂交中为什么在双缺板上长?酵母双杂交中为什么在双缺板上长,
2170微郊
： 你好,因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长.如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果不能互作,就不生长.酵母(saccharomyces) 是基因克隆实验中常用的真核生物受体细胞,培养酵母菌和培养大肠杆菌一样方便.酵母克隆载体的种类也很多.酵母菌也有质粒存在,这种2μm 长的质粒称为2μm 质粒,约6 300bp.这种质粒至少有一段时间存在于细胞核内染色体以外,利用2μm 质粒和大肠杆菌中的质粒可以构建成能穿梭于细菌与酵母菌细胞之间的穿梭质粒.酵母克隆载体都是在这个基础上构建的
皇眨18590959954：
请问 酵母双杂筛库在四缺培养基上显蓝斑后,提取prey(猎物质粒)时应用什么培养基摇菌比较好?为什么? -
2170微郊
： 因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长.如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果不能互作,就不生长.
皇眨18590959954：
酵母双杂交的常见问题 -
2170微郊
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
皇眨18590959954：
酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒,没有 -
2170微郊
： 酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒 发展起来的各种双杂交系统大多是以Fields等人建立的系统为基础的.这些新系统主要对报道基因、“诱饵”表达载体以及“猎物”表达载体等做了一些改进.其中一个重要改进是引入额外的报...
皇眨18590959954：
酵母双杂交过程中转化完菌长的特别多但是很小怎么办 -
2170微郊
： 去生物方面的论坛讨论吧!这种地方娱乐娱乐还行,专业的东西就别参考了. 比如小木虫就挺好. 你的双杂背景太多,在涂版时可适量加一些3-AT.现在的话,就等等看吧,从里面挑选出一些比较大的点.
皇眨18590959954：
酵母双杂交的局限性 -
2170微郊
： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
皇眨18590959954：
酵母菌双杂交到底是什么? 请解释一下 -
2170微郊
： 100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问.酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段.实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合.如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或能够在基本培养基上生长),反之则不能.参考资料:http://baike.baidu.com/link?url=gzze1wAVvxbMwPcV8xUjouZsKo1gCjEVnSCm7QeV0m-3CW_1od9IqgWbY25byn91OzKfM5kGeMRah5KdaccKta
皇眨18590959954：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
2170微郊
： 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号放大;④检测的结果是基因表达产物的累积效应,可检测存在于蛋白质间的微弱或暂时的相互作用.2、真实性.检测在活细胞内进行,作用条件与作用力无需模拟,在一定程度上代表细胞内的真实情况.3、简洁性.融合蛋白相互作用后,减少了制备抗体和纯化蛋白质的繁琐步骤. 3、广泛性.采用不同组织器官细胞类型和分化时期的材料构建cDNA文库,能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质,适用于部分细胞质、细胞核及膜结合蛋白.
皇眨18590959954：
酵母双杂交实验有哪些注意事项? -
2170微郊
： 如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办?在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好.首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30℃下温浴,直至平板上的...
皇眨18590959954：
酵母双杂要用缺陷培养基摇菌吗 -
2170微郊
： 是的.如果不用缺陷培养基,细胞在没有胁迫的情况下质粒容易丢失.
