酵母单杂交实验步骤
答：小配体-受体相互作用是生物学中许多基本过程的基础，也是医学上对人类疾病进行药物干预的基础。我们在此报道了一种遗传系统，称为酵母三杂交系统，用于检测体内配体-受体的相互作用。该系统改编自酵母双杂交系统，其中结合了第三种合成杂交配体，以地塞米松和FK506共价连接的异源二聚体作为杂合配体，验证了该...
答：该技术利用酵母细胞的自身特性，使得两个蛋白质分别与介导转录激活的Gal4转录因子不同区域结合，从而激发酵母细胞内特定的报告基因（reportergene）的表达。当两个蛋白质的结合能够激活报告基因的表达，则表明这两个蛋白质之间存在相互作用关系。具体实验步骤如下：1.构建酵母表达载体：将含有自身复制元件2μ...
答：酵母单杂交技术最早是1993年由Li等从酵母双杂交技术发展而来，通过对报告基因的表型检测，分析DNA与蛋白之间的相互作用，以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测特定转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和可靠性，现已被广泛用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的特定转录...
答：将这种技术微量化、阵列化后则可用于大规模蛋白质之间相互作用的研究。在实际工作中，人们根据需要发展了单杂交系统、三杂交系统和反向杂交系统等。Angermayr等设计了一个SOS蛋白介导的双杂交系统。可以研究膜蛋白的功能，丰富了酵母双杂交系统的功能。此外，酵母双杂交系统的作用也已扩展至对蛋白质的鉴定。...
答：5.生物芯片技术是基于生物大分子间相互作用的大规模并行分析方法，使得生命科学研究中所涉及的样品反应、检测、分析等过程得以连续化、集成化和微型化，现已成为当今生命科学研究领域发展最快的技术之一 6.染色体沉淀：用细菌基因组与目的蛋白孵育，然后用甲醛交联，随机断裂，然后WB分析。7.酵母单杂交： ...
答：(l)单孢分离法:是每次或每支试管只取一个担孢子, 让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝,有结实能力,可采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上较少采用,而且技术复杂,一般采用多孢分离法。 (2)多孢分离法:就是把许多孢子接种在同一培养基上,让它们萌发、自由交配来获得食用菌...
答：制备酿酒酵母的单倍体细胞如下：单倍体细胞是酿酒酵母进行杂交育种所必要的,可以设想,单倍体细胞原生质律的制备在杂交育种上也是重要的,它对增加杂交频率乃至远缘杂交的取得成功是会有所促进的。细胞周期由 分裂间期（G1、S、G2） 和 有丝分裂期（M期） 构成。众所周知，有丝分裂是细胞分裂的重要环节...
答：或者100μL（φ10cm）X-α-Gal储存液于预制平板上；置于37℃培养箱至液体被吸收（DMF挥发性差，最长可放4小时）；将转化细菌或酵母涂于平板上，于37℃或30℃培养直至蓝色菌斑出现。X-α-Gal，是一种酵母半乳糖苷酶(MEL1)的显色底物，用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。
答：1.将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；2.将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；3.再将文库质粒转化到酵母中；4.通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。
答：酵母双杂交是常用的蛋白质相互作用研究方法，其中诱饵bait和靶标prey蛋白质通过特定的载体表达系统与每个目标蛋白质进行相互作用实验。以下是构建酵母双杂交诱饵载体的一般步骤：选择适当的酵母双杂交系统：常用的酵母双杂交系统包括Gal4系统和LexA系统。选择适合你实验需要的系统。设计诱饵序列：诱饵是你感兴趣...
网友评论：
曹征18711358258：
酵母单杂交的介绍 -
28528敖苗
： 酵母单杂交技术是一种研究蛋白质和特定DNA序列相互作用的技术方法,主要包括四个流程即:一、筛选含有报告基因的酵母单细胞株;二、构建表达文库;三、重组质粒转化至酵母细胞;四、阳性克隆菌株的筛选.
曹征18711358258：
酵母单杂交方法分析转录激活活性的原理和过程 -
28528敖苗
： 0 引言酵母单杂交(yeast one hybrid)技术是体外分析DNA与细胞内蛋白质相互作用的一种方法,通过对酵母细胞内报告基因表达状况的分析,来鉴别DNA结合位点并发现潜在的结合蛋白基因,或对DNA结合位点进行分析. 运用此技术,能筛选...
曹征18711358258：
酵母单杂交实验中cDNA文库构建试剂盒的选择及操作步骤是啥啊?
28528敖苗
： 酵母单杂交法是研究特定DNA序列和蛋白质相互作用的有效手段,cDNA文库构建作为酵母单杂交实验的核心技术,那么酵母单杂交实验中cDNA文库选择什么试剂盒构建呢? 酵母单杂交体系(yeast one-hybrid system)常用于研究DNA-蛋白质...
曹征18711358258：
cDNA文库必须满足什么条件?其构建包括哪些步骤? -
28528敖苗
： 条件:1 、要使用mRNA经过反转录PCR产生cDNA.2 、要进一步获得cDNA全长3 、加适当接头,连接到适当的载体内.4 、转化受体细胞,构建为cDNA文库. 基本步骤包括:RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,热酚...
曹征18711358258：
酵母单双杂交? -
28528敖苗
： 酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的,研究活细胞内蛋白质相互作用,对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到,它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术.大量的研究文献表明...
曹征18711358258：
遗传学实验的科学杂交实验包括哪些步骤 -
28528敖苗
： 做果蝇单因子科学杂交实验步骤 1、选处女蝇:每两组做正、反交各1瓶,正交选野生型红眼为母本,突变型白眼为父本,将母本旧瓶中的果蝇全部麻醉处死或释放,在8-12h内收集处女蝇5只,将处女蝇和5只雄蝇转移到新的杂交瓶中,贴好标签,于25℃培养; 2、 7d后,释放杂交亲本(一定要干净); 3、再过4-5天,F1成蝇出现,在处死亲本7天后,集中观察记录F1眼色和性别表型; 4、选取5对F1代果蝇,转入一新培养瓶,于25℃培养,其余F1代果蝇处死; 5、7d后,处死F1亲本; 6、再过5d,F2成蝇出现,开始观察记录眼色和性别,连续统计7d;
曹征18711358258：
怎么证明一个蛋白是转录因子 -
28528敖苗
： 1你要纯化蛋白并对其进行序列和结构分析, 2你要将蛋白的和DNA的结合部位找到(ChIP可以做到,需要的是能制备蛋白的抗体) 3 酵母单杂交,在报告基因上游克隆你的蛋白结合的启动子,将你的目标蛋白加入体系看能否表达,表达就说明是转录因子,否则不是. 当然,可能你的目标蛋白不能和DNA结合,那么你在做ChIP的时候就会发现没有DNA与蛋白的结合,也可能你的蛋白只和DNA结合但不能激活转录的起始,这就需要你通过蛋白的结构将蛋白质的DNA结合区与一广谱转录激活因子结合,从而验证其功能.
曹征18711358258：
酵母单杂交系统与酵母双杂交系统的异同点? -
28528敖苗
： 酵母双(单)杂交系统:Y2H膜蛋白系统;Grow' ' n' ' Glow GFP酵母单(双)杂交系统;Grow´ n´ Glow ACE1酵母双杂交系统;Y2H膜蛋白系统cDNA文库;酵母载体;酵母菌;酵母转化和质粒提取;β -半乳糖苷酶活性检测试剂盒; 噬菌体展示:pSKAN噬菌体展示系统;Anti-plll (g3p)抗体;抗体;pSKAN8载体;pMAMPF3-PSTI4载体;Lambda PS噬菌体裂解物;Anti-hPSTI 基因文库:Y2H cDNA文库;Lambda PS基因文库;
曹征18711358258：
酵母单杂交pabai可以不用线性化载体吗 -
28528敖苗
： 酵母单杂交pabai可以不用线性化载体 酵母单杂交技术最早是1993年由Li等从酵母双杂交技术发展而来,通过对报告基因的表型检测,分析DNA与蛋白之间的相互作用,以研究真核细胞内的基因表达调控.由于酵母单杂交方法检测特定转录因子...
