酵母双杂交原理及步骤
答：酵母双杂交由Fields在1989年提出. 他的产生是基于对真核细胞转录因子特别是酵母转录因子GAL4性质的研究. GAL4包括两个彼此分离的但功能必需的结构域. 位于N端1-147位氨基酸残基区段的DNA结合域（DNA binding domain，DNA-BD）和位于C端768-881 位氨基酸残基区段的转录激活域（Activation domain,AD)....
答：单独的BD虽然能和启动子结合，但是不能激活转录。而不同转录激活因子的BD和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能。如酵母细胞的Gal4蛋白的BD与大肠杆菌的一个酸性激活结构域B42融合得到的杂合蛋白仍然可结合到Gal4结合位点并激活转录。在酵母双杂交系统中，“诱饵”蛋白X克隆至DNA-BD载体中，...
答：100字有点困难，但是还是可以试试，如果有疑问可以追问。酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段。实验中将A蛋白与转录激活因子连接，B蛋白与另一个转录因子（比如RNA聚合酶的alpha亚基）融合。如果A能够和B发生互作，那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录，从而使菌株产生某些特性（抗性或...
答：1.将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；2.将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；3.再将文库质粒转化到酵母中；4.通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。
答：Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型，将前者与Gal4的BD结构域融合，另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”（bait）和“猎物”或靶蛋白（prey or target protein）。如果在Snf1和Snf2之间...
答：1．3 pGBKT7．ps3和t~alrr7．T质粒的制备用2 mL LB液体培养基扩增pGBKT7一p53和pGADT7一T质 粒。分别用小规模碱裂解法【7 (AIK法)和QtarREP Miniprep Kit试剂盒(QIAGEN法)提取质粒。紫外分 光光度法测0D260／280，并计算质粒DNA含量。1．4 酵母双杂交共转化实验按酵母操作手册 建议的方法...
答：酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子（如GAL4等）的DNA结合结构域基因和转录激活因子（如GAL4等）激活结构域基因，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。
答：注意事项 （1）酵母双杂交对照的设定 常规的酵母双杂交操作时一般会设定阳性对照、阴性对照以及显色系统对照三种对照，以MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统为例：阳性对照：pGADT7-T + pGBKT7-53，其中T蛋白和53蛋白是已经明确在酵母细胞内能够发生结合并启动报告基因表达的两种蛋白。阴性对照：pGADT7-...
答：蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。一、酵母双杂交系统：酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动...
网友评论：
生丁17346985833：
酵母双杂交(表达产物分析作用的系统) - 百科
8010方兰
： 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统,也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法.该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.
生丁17346985833：
酵母双杂交的原理? -
8010方兰
： 酵母双杂交系统由 Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
生丁17346985833：
酵母双杂交体系克隆基因的原理和方法 -
8010方兰
： 酵母双杂交是验证蛋白质相互作用的实验体系,不是用来克隆基因的.如果你需要酵母双杂的相关资料,请留下你的邮箱.
生丁17346985833：
论述酵母双杂交技术的原理和应用情况 -
8010方兰
：[答案] 酵母双杂交技术研究进展张迪 霍克克 顾科隆 赵翔 李育阳提 要 酵母双杂交技术是一种有效的真核活细胞内研究方法,在蛋白质相互作用的研究方面得到了广泛的应用并取得了许多有价值的重要发现.作为一个完整的实验系统,...
生丁17346985833：
酵母双杂交系统原理的应用 -
8010方兰
： 酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用,具有高度敏感性. 主要是由于: ①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达. ②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行, 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤,降低了信号强度. ③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强,后者又与启动子DNA结合, 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定. ④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大. 同时, 酵母表型, X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感.
生丁17346985833：
酵母双杂交系统的介绍 -
8010方兰
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
生丁17346985833：
酵母双杂交法的原理? -
8010方兰
： 就利用AD和BD之间的位置接近,能够是某一报告基因激活而表现出某一特性而得到鉴定. 将检测蛋白结合到AD上,诱饵蛋白结合到BD上,如果检测蛋白与诱饵蛋白结合则AD和BD靠近,从而使BD结合到UAS上,AD结合到转录起始位点,使报告基因激活,显现出一些特性,而使人能够通过这些特性判断这两种蛋白有无结合能力.若无此特性出现则无结合力.
生丁17346985833：
酵母双杂交的具体过程是什么?(中文) -
8010方兰
： 菌株与质粒AH109酵母菌株(MATa,trp1. 901,leu2—3,112,ura3-52,his3-200,gal4A,gal8O~X, LYS2::G地1U^s-GALlT^T^-HIS3, G U^s—GAI2T^T^- ADE2,URA3::h吐1U^s.h吐1T^T^.1acZ),YM187酵母 菌株(NATQ,um3-52,his3-200,ade2—101,trpl-...
生丁17346985833：
酵母菌双杂交到底是什么? 请解释一下 -
8010方兰
： 100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问.酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段.实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合.如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或能够在基本培养基上生长),反之则不能.参考资料:http://baike.baidu.com/link?url=gzze1wAVvxbMwPcV8xUjouZsKo1gCjEVnSCm7QeV0m-3CW_1od9IqgWbY25byn91OzKfM5kGeMRah5KdaccKta
