酵母双杂交过程及原理
答:酵母双杂交系统的研究历程起始于Fields等人的开创性工作,他们以调控SUC2基因的Snf1和Snf2两个蛋白质为研究对象。在这个系统中,Snf1蛋白被融合到Gal4的DB结构域,而Snf2蛋白则与Gal4的AD结构域的酸性区域相连。DB和AD的结合形成了一对特殊蛋白,通常称为“诱饵”(bait)和“猎物”(prey或target ...
答:Fields在1989年提出了酵母双杂交技术。这项技术的开发基于对真核生物转录因子,尤其是酵母转录因子GAL4的研究。GAL4由两个功能区域组成:N端的DNA结合域(DNA-BD)和C端的转录激活域(AD)。DNA-BD负责识别并结合到GAL4响应基因的上游激活序列(UAS),而AD则通过与转录机制中的其他组分相互作用来激活...
答:1. 实验目的与背景 本次实验旨在构建龙须菜高温胁迫下的cDNA文库,并使用CaM作为诱饵质粒构建表达载体pGBKT-CaM。通过SMART技术将重组质粒转化到酵母菌Y187中,以研究蛋白质之间的相互作用。2. 酵母双杂交系统原理 酵母双杂交系统基于酵母转录激活因子GAL4的结构特性。GAL4包含DNA结合域(BD)和转录激活域...
答:前者可识别DNA上的特异序列,并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游,转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用,启动它所调节的基因的转录。两个结构域不但可在其连接区适当部位打开, 仍具有各自的功能。而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的...
答:酵母双杂交由Fields在1989年提出. 他的产生是基于对真核细胞转录因子特别是酵母转录因子GAL4性质的研究. GAL4包括两个彼此分离的但功能必需的结构域. 位于N端1-147位氨基酸残基区段的DNA结合域(DNA binding domain,DNA-BD)和位于C端768-881 位氨基酸残基区段的转录激活域(Activation domain,AD)....
答:酵母双杂交是常用的蛋白质相互作用研究方法,其中诱饵bait和靶标prey蛋白质通过特定的载体表达系统与每个目标蛋白质进行相互作用实验。以下是构建酵母双杂交诱饵载体的一般步骤:选择适当的酵母双杂交系统:常用的酵母双杂交系统包括Gal4系统和LexA系统。选择适合你实验需要的系统。设计诱饵序列:诱饵是你感兴趣...
答:把原来spaces空间上的一篇蛋白质与蛋白质间相互作用研究方法转来,算是实验技巧分类目录的首篇。 一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后,诱饵蛋白结合于报道基因的启动子,启动报道基因在酵母细胞内的表达,如果检测...
答:Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型,将前者与Gal4的BD结构域融合,另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”(bait)和“猎物”或靶蛋白(prey or target protein)。如果在Snf1和Snf2之间...
答:该系统通过将感兴趣的蛋白质分别与DNA绑定域(DNA-BD)和活化域AD融合,使其在约束条件下相互结合形成蛋白质复合物,并驱动酵母细胞中的报告基因的表达。因此,双杂交系统主要用于发现蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系。酵母单杂交系统和双杂交系统的原理和应用范围存在明显的差异,需要根据具体的研究课题...
答:100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问。酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段。实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合。如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或...
网友评论:
养盲19198892268:
酵母双杂交(表达产物分析作用的系统) - 百科
31359师丁
: 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统,也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法.该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.
养盲19198892268:
酵母双杂交的原理? -
31359师丁
: 酵母双杂交系统由 Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
养盲19198892268:
论述酵母双杂交技术的原理和应用情况 -
31359师丁
:[答案] 酵母双杂交技术研究进展张迪 霍克克 顾科隆 赵翔 李育阳提 要 酵母双杂交技术是一种有效的真核活细胞内研究方法,在蛋白质相互作用的研究方面得到了广泛的应用并取得了许多有价值的重要发现.作为一个完整的实验系统,...
养盲19198892268:
酵母双杂交系统原理的应用 -
31359师丁
: 酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用,具有高度敏感性. 主要是由于: ①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达. ②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行, 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤,降低了信号强度. ③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强,后者又与启动子DNA结合, 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定. ④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大. 同时, 酵母表型, X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感.
养盲19198892268:
酵母双杂交系统的介绍 -
31359师丁
: 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
养盲19198892268:
酵母双杂交法的原理? -
31359师丁
: 就利用AD和BD之间的位置接近,能够是某一报告基因激活而表现出某一特性而得到鉴定. 将检测蛋白结合到AD上,诱饵蛋白结合到BD上,如果检测蛋白与诱饵蛋白结合则AD和BD靠近,从而使BD结合到UAS上,AD结合到转录起始位点,使报告基因激活,显现出一些特性,而使人能够通过这些特性判断这两种蛋白有无结合能力.若无此特性出现则无结合力.
养盲19198892268:
酵母双杂交的具体过程是什么?(中文) -
31359师丁
: 菌株与质粒AH109酵母菌株(MATa,trp1. 901,leu2—3,112,ura3-52,his3-200,gal4A,gal8O~X, LYS2::G地1U^s-GALlT^T^-HIS3, G U^s—GAI2T^T^- ADE2,URA3::h吐1U^s.h吐1T^T^.1acZ),YM187酵母 菌株(NATQ,um3-52,his3-200,ade2—101,trpl-...
养盲19198892268:
酵母双杂交体系克隆基因的原理和方法 -
31359师丁
: 酵母双杂交是验证蛋白质相互作用的实验体系,不是用来克隆基因的.如果你需要酵母双杂的相关资料,请留下你的邮箱.
养盲19198892268:
酵母双杂交系统原理的优点 -
31359师丁
: 双杂交系统的另一个重要的元件是报道株.报道株指经改造的、含报道基因(reporter gene)的重组质粒的宿主细胞. 最常用的是酵母细胞, 酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点: 〈1〉 易于转化、便于回收扩增质粒. 〈2〉...