ChIP-seq数据分析(一):从raw reads到peaks

最终的结果表明这6个数据的质量都很好,所以原文并没有进行额外的过滤操作。需要注意的是,在该文献中ein2-5_air_MPGB_1和ein2-5_ethylene_MPGB_1两个阴性对照呈现出reads重复率高的特征

-M 1 --best --strata 的作用是将多比对中得分最高的一条比对记录保留,原文在这里采用的是保留唯一比对的reads记录,有些区别。

bowtie比对完之后会在log文件中报告比对率,比如

还可以用samtools flagstat简单统计比对率

又统计了一下fq里面的reads数量

这一步没有什么实质性的作用,但能加深对reads比对率、唯一比对、多比对、reads数、比对记录数等的理解。

"Duplicate reads were removed using SAMtools."相关的NC文章是这样做的。

并用samtools index为4个待分析的bam建立索引。

文章只强调了--nomodel, -p 0.01这两个参数。

看参数的值就能知道bw存储的是什么信息:横坐标是在基因组上的一对起始位置,窗口大小是50bp,纵坐标是将深度标准化之后得到的RPKM。

除了bamCoverage,bamCompare也能将bam->bw,并且同时考虑处理和对照,以消除噪声。原文是这样说的: To show ChIP binding signal surrounding TSSs or in gene bodies, read coverage was first calculated using the bamCompare tool (RPKM, Log2(ChIP/IgG) in deepTools.

在igv下面看看bed, bam, bw, bgd是什么样子

可以看到,bam, bw, bdg整体趋势一致,并且跟对照相比,可以显示出peaks。

针对的是summits.bed文件,看peaks(一个峰,精确到了单碱基位置)属于哪一个基因?或是离哪一个基因最近?属于哪一个区域?

这个summits的注释跟变异检测注释原理差不多,只是分区不一样。

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