酵母双杂交的缺点
答：酵母单杂交系统和双杂交系统是两种常用的蛋白质相互作用检测方法，它们的主要区别在于检测的原理和应用范围不同。酵母单杂交系统Y1H（Yeast One Hybrid System）用于发现DNA序列与转录因子结合的技术。该系统通过将感兴趣的DNA序列插入到启动子上游的启动子活化区域AD（Activation Domain）所编码的报告基因前，...
答：“自1989年Field等人建立了第一个基于酵母的细胞内检测蛋白相互作用的系统以来,酵母双杂交系统已经越来越多的应用于鉴定新的蛋白与蛋白相互作用,鉴定蛋白级联底物以及鉴定突变对蛋白与蛋白结合的影响等。有文献统计,目前已知的蛋白质相互作用至少有一半是通过酵母双杂交实验发现的!” 而文库筛选结果直接由文库质量的好坏所...
答：4.杂交效率不高，该如何处理？在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选大的、新鲜的克隆进行培养，经过离心和重悬后，再使用血球计对细胞进行计数。密度应该在1 x 109/ml。一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻毒性，同时又能保证...
答：酵母双杂是检验蛋白质相互作用的常用手段，很管用啊~~而且双杂交乃至三杂交载体研究得越来越成熟。不过，弱相互作用或者一过性相互作用不适用，此外营养筛选假阳性较高
答：如果你的目标蛋白来自其他物种,这个实验可能并不能反应蛋白在原物种细胞里的真实状态,最后,有的蛋白质可能自身就能够激活报告基因表达,比如转录因子,这样,这类蛋白就没办法通过酵母双杂交进行筛选和验证相互作用了(当然也可以将该蛋白换至 AD 载体上,但是依然有其局限性)。【二】荧光共定位,Fluorescenceco-localization...
答：在逆双杂交系统中，Vidal团队在URA3基因的启动子区域引入了Gal4结合位点，使得酵母菌株在特定条件下才能存活。在缺乏尿嘧啶的选择性培养基上，只有当“诱饵”和“猎物”蛋白结合并激活URA3基因时，酵母菌才能生长。而在含有5-FOA的完全培养基上，这种结合会抑制细胞生长。如果目的蛋白，如融合了DB或AD的...
答：酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i 。典型的真核生长转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的...
答：而无需复杂的蛋白质分离纯化操作，故在蛋白研究中，具有一定的优势；而且，酵母属真核细胞，通过酵母系统得到的结果比其他体外技术获得的结果更能体现真核细胞内基因表达调控的真实情况.1 酵母单杂交技术的原理 酵母单杂交技术最早是1993年由Li et al [1,2]从酵母双杂交技术发展而来，酵母双杂交技术通过...
答：也可用于受体功能的鉴定。缺点是GST有可能影响 融合蛋白的空间结构，另外，蛋白质浓度对实验也 有一定影响。3.6 酵母双杂交技术 许多真核生物的转录激活因子通常具有两个 可独立存在的结构域，即DNA结合域（BD）与转 录激活域（AD）。这两个结构域各具功能，互不影 响。但一个完整的激活特定基因...
答：真菌孢子很难杀死。如果可能的话，挑酵母单细胞重新纯化培养，再做实验。
网友评论：
长秀18539985438：
酵母双杂交(表达产物分析作用的系统) - 百科
19065红堵
：[答案] 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号...
长秀18539985438：
酵母双杂交的局限性 -
19065红堵
： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
长秀18539985438：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
19065红堵
： 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号放大;④检测的结果是基因表达产物的累积效应,可检测存在于蛋白质间的微弱或暂时的相互作用.2、真实性.检测在活细胞内进行,作用条件与作用力无需模拟,在一定程度上代表细胞内的真实情况.3、简洁性.融合蛋白相互作用后,减少了制备抗体和纯化蛋白质的繁琐步骤. 3、广泛性.采用不同组织器官细胞类型和分化时期的材料构建cDNA文库,能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质,适用于部分细胞质、细胞核及膜结合蛋白.
长秀18539985438：
酵母双杂交的常见问题 -
19065红堵
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
长秀18539985438：
酵母菌作为宿主细胞有哪些优点缺点 -
19065红堵
： 酵母宿主细胞AH109和Y190主要是筛选方式和用途的侧重点不同酵母宿主细胞AH109株为色氨酸营养缺陷,可作为蛋白真核表达系统,也可用于酵母双杂交. 酵母菌株Y190更多用于酵母双杂交
长秀18539985438：
酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒,没有 -
19065红堵
： 酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒 发展起来的各种双杂交系统大多是以Fields等人建立的系统为基础的.这些新系统主要对报道基因、“诱饵”表达载体以及“猎物”表达载体等做了一些改进.其中一个重要改进是引入额外的报...
长秀18539985438：
酵母双杂交的特点 -
19065红堵
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
长秀18539985438：
酵母单杂交系统与酵母双杂交系统的异同点? -
19065红堵
： 酵母双(单)杂交系统:Y2H膜蛋白系统;Grow' ' n' ' Glow GFP酵母单(双)杂交系统;Grow´ n´ Glow ACE1酵母双杂交系统;Y2H膜蛋白系统cDNA文库;酵母载体;酵母菌;酵母转化和质粒提取;β -半乳糖苷酶活性检测试剂盒; 噬菌体展示:pSKAN噬菌体展示系统;Anti-plll (g3p)抗体;抗体;pSKAN8载体;pMAMPF3-PSTI4载体;Lambda PS噬菌体裂解物;Anti-hPSTI 基因文库:Y2H cDNA文库;Lambda PS基因文库;
长秀18539985438：
酵母单杂交的缺点 -
19065红堵
： 由于插入的靶元件与酵母内源转录激活因子可能发生相互作用,或插入的靶元件不需要转录激活因子就可以激活报告基因的转录,因此往往产生假阳性结果.如果酵母表达的AD融合蛋白对细胞有毒性,或融合蛋白在宿主细胞内不能稳定地表达,或融合蛋白发生错误折叠,或者不能定位于酵母细胞核内,以及融合的Gal4AD封闭了蛋白质上与DNA相互作用的位点,则都可能干扰AD融合蛋白结合于靶元件的能力,从而产生假阴性结果.
