酵母双杂交流程
答：1．4 酵母双杂交共转化实验按酵母操作手册 建议的方法进行转化，取不同量的上述两种方法提 取的pGBKT7—053和pGADT7．T质粒共转化到AH109 酵母菌株中，将转化好的细胞按照1：10、1：100、1：10003种不同浓度稀释，然后取100 铺于SD／ Trp／一Leu平板上，待长出克隆后计算生长克隆数目 (cfu)。
答：Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型，将前者与Gal4的BD结构域融合，另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”（bait）和“猎物”或靶蛋白（prey or target protein）。如果在Snf1和Snf2之间...
答：酵母双杂交技术是一种在分子生物学研究中常用的技术，主要用于研究蛋白质之间的相互作用。这种技术的原理是基于真核生物的转录因子TFIID的结构，其中TFIID由TD和TBP两个亚基组成，它们之间通过一个名为helix-loop-helix的结构相互连接，形成稳定的复合物。在酵母双杂交系统中，TD和TBP被分别替换为两个目标...
答：文库构建流程: 1.RNA提取 2.mRNA提取 3.cDNA的酶促法合成 4.cDNA连接接头 5.cDNA按长度分离 6.cDNA与酵母双杂交文库载体(pGADT7或者pDEST22)进行all-direct重组 7.重组产物电转化 8.文库检测以及质粒提取 3.1 All-direct方法与SMART方法的比较与优势 3.2 All-direct方法与Gateway方法的比较与优势 25个工作...
答：可参考：诱饵基因转化筛库宿主菌Y190 1） 3 个1mm 克隆接种于3mlYPD 液体培养基30℃振荡培养20 小时(过夜)，OD600 达到1.2 左右。2） 将此3ml 菌液接入大体积(体积视转化个数定)YPD 中培养4 小时左右，使 培养液OD600 达到0.6。3） 50ml 离心管收集菌液(Falcon, BD)，Eppendorf Centrifuge ...
答：1、膜体系有哪些诱饵载体？膜体系酵母双杂交有三种诱饵载体，分别如下：pBT3-N pBT3-SUC pBT3-STE 2、如何选择载体?根据蛋白结构域的不同，选择的载体有所区别，下表中我们总结了不同情况下适合选择的载体。那么怎么预测蛋白的结构域呢？具体预测流程如下：1、CDS序列翻译为氨基酸序列 https://www....
答：(2)应用：发现新的蛋白质和蛋白质的新功能；在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用；筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影响；建立基因组蛋白连锁图。[考点]酵母双杂交系统的基本原理和应用。酵母双杂交体系(two-hybrid system)也叫interaction trap(相互作用陷阱)，是上世纪90年代初发展起来的...
答：酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。原理：酵母双杂交系统的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式...
答：将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；再将文库质粒转化到酵母中。通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白，从酵母中分离质粒然后转化E. coli ，从大肠杆菌中提取质粒并测序 ，在数据库中比对所测定序列与...
答：然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用。比如：1、诱饵蛋白表达载体与猎物蛋白表达载体的构建 2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性，毒性检测 3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告 4、 无相互作用时诱饵和猎物蛋白的表达情况的Western blotting检测 酵母双杂交...
网友评论：
双店18788528807：
酵母双杂交的具体过程是什么?(中文) -
15776濮卢
： 菌株与质粒AH109酵母菌株(MATa,trp1. 901,leu2—3,112,ura3-52,his3-200,gal4A,gal8O~X, LYS2::G地1U^s-GALlT^T^-HIS3, G U^s—GAI2T^T^- ADE2,URA3::h吐1U^s.h吐1T^T^.1acZ),YM187酵母 菌株(NATQ,um3-52,his3-200,ade2—101,trpl-...
双店18788528807：
酵母双杂交(表达产物分析作用的系统) - 百科
15776濮卢
： 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统,也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法.该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.
双店18788528807：
酵母双杂交系统的介绍 -
15776濮卢
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
双店18788528807：
酵母双杂交系统原理的应用 -
15776濮卢
： 酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用,具有高度敏感性. 主要是由于: ①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达. ②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行, 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤,降低了信号强度. ③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强,后者又与启动子DNA结合, 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定. ④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大. 同时, 酵母表型, X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感.
双店18788528807：
酵母双杂交系统到底是啥回事?有啥用 -
15776濮卢
： 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
双店18788528807：
酵母菌双杂交到底是什么? 请解释一下 -
15776濮卢
： 100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问.酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段.实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合.如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或能够在基本培养基上生长),反之则不能.参考资料:http://baike.baidu.com/link?url=gzze1wAVvxbMwPcV8xUjouZsKo1gCjEVnSCm7QeV0m-3CW_1od9IqgWbY25byn91OzKfM5kGeMRah5KdaccKta
双店18788528807：
酵母单双杂交? -
15776濮卢
： 酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的,研究活细胞内蛋白质相互作用,对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到,它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术.大量的研究文献表明...
双店18788528807：
酵母双杂交的特点 -
15776濮卢
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
双店18788528807：
酵母双杂交的常见问题 -
15776濮卢
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
